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Gm、Km因子鉴定

1 拼音

Gm 、Km yīn zǐ jiàn dìng

2 操作名称

Gm、Km因子鉴定

3 用品及准备

试管,抗D血清O型R1R2红细胞,96孔V型反应板,磷酸缓冲液

4 方法及内容

1.制备致敏红细胞

(1)取12mm×75mm试管1只,加入已知Gm或Km因子的抗D血清。

(2)再向试管中加入新鲜O型R1R2红细胞1份。

(3)混匀37℃温育1h。

(4)红细胞洗涤3次,配成2%浓度的红细胞悬液待用。

2.抗Gm、Km抗体标定

(1)取96孔V型微量板1块,向每孔中加磷酸盐缓冲液25μl。

(2)抗Gm、Km抗体作倍量稀释。

(3)向每孔中加入0.5%的致敏红细胞25μl,振荡混匀30s。

(4)室温下反应10~15min。

3.血凝抑制反应,检定Gm、Km因子

(1)取待检血清离心

(2)96孔V型微量板每孔中加磷酸盐缓冲液25μl。

(3)将待测样本用稀释管从1:1倍比稀释至成1:32,共稀释2排。

(4)第1排在1:16,1:32孔中加入最佳稀释度的抗Gm、Km抗血清25μl。

(5)第2排为阴性对照,各孔加入磷酸盐缓冲液25μl。

(6)振荡混匀30s,中和10~15min

(7)每孔加入2%致敏的红细胞悬液25μl。

(8)2000r/min离心5min。

(9)将微量板倾斜呈45°,5min后观察结果。

5 结果判读

无拖尾现象为阳性,表示无相应Gm、Km因子;有拖尾现象为阴性,表示有相应Gm、Km因子。

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