医学百科

冻干皮上划痕人用布氏菌病活菌苗

1 拼音

dòng gàn pí shàng huá hén rén yòng bù shì jūn bìng huó jūn miáo

[1]品系采用布氏菌弱毒菌株,经培育后冻干制成。用于预防布氏菌病

2 冻干皮上划痕人用布氏菌病活菌苗制造及检定规程

2.1 菌种

1.1 用弱毒牛型104M菌种。菌种应由中国药品生物制品检定所分发或经同意。

1.2 菌种应经冻干,保存于2~8℃,并指定专人负责保管。

1.3 禁止使用通过动物后再分离培育出之菌株制造菌苗

1.4 菌种的免疫力试验每3年至少检定一次。

1.5 菌种检定

1.5.1 培养特性

在含有1∶50000碱性复红培养基上应生长,但在含有同样浓度的硫堇培养基上不应生长(亦可用纸片法检查),在肝琼脂斜面培养基上产生微量硫化氢涂片镜检应为革兰氏阴性杆菌

1.5.2 变异检查

生理盐水将新鲜培养物制成含菌数为25亿~30亿/ml的菌悬液,置90℃水浴中30分钟,不应出现凝集现象。用同样浓度的菌悬液,与1∶1000三胜黄素水溶液等量混合,于37℃放24小时,不应出现凝集现象。用结晶紫菌落染色法检查,菌落变异率不得超过3%。

1.5.3 噬菌体裂解试验

将菌种接种于肝琼脂平皿上,滴加布氏菌Tb噬菌体1滴,于37℃培育44~48小时,在噬菌体流过的地方应无本菌生长。

1.5.4 血清学试验

用生理盐水将新鲜培养物制成含菌数为50亿/ml的菌悬液,与已知效价的布氏菌诊断血清作凝集反应,其凝集价应达到血清原效价。

1.5.5 残余毒力检查

用生理盐水将37℃培育44~48小时之肝琼脂斜面新鲜培养物制成菌悬液,并稀释成15亿/ml、30亿/ml、60亿/ml、120亿/ml和240亿/ml等5个浓度的菌悬液。取体重18~20g小白鼠25只分为5组,各组分别用不同浓度的菌悬液腹腔注射,每只0.5ml,观察7天,计算LD50,其值应为10~20亿菌。

1.5.6 免疫力试验

用生理盐水将菌种1代新鲜培养物制成浓度为2亿/ml的菌悬液。取体重300~350g豚鼠10只。每只皮下注射1ml,经25~30天后,每只豚鼠皮下攻击羊型强毒布氏菌10个或20个感染量(MID)。同时取3组健康豚鼠作对照,每组3只,分别于各组豚鼠皮下注射0.5、1及2个MID。免疫及对照豚鼠于注射毒菌悬液后均观察25~30天后解剖,取出鼠蹊淋巴结、腹主动脉旁淋巴结、肝及脾分别接种肝琼脂中管斜面培养基,于37℃培育10天。如免疫动物组织之培养物有布氏菌生长,应用硫堇染科培养基(亦可用纸片法)和硫化氢反应做菌型鉴别试验。注射1个MID的3只对照豚鼠都必须发生全身感染,即肝脏脾脏应分离出羊型毒菌。免疫组攻击10个MID时, 10只豚鼠中不应有2只以上分离出羊型毒菌;攻击20个MID时,10只豚鼠中不应有3只以上分离出羊型毒菌。

2.2 菌苗制造

2.1 制造菌苗的工作室应专用,不得与其他细菌工作混用。生产中应严格执行无菌操作,非制造菌苗用的其他布氏菌不得带到生产工作室内。

2.2 制造菌苗可用pH6.6~7.2的肝浸液琼脂或其他适宜培养基。

2.3 启开冻干菌种,接种在肝琼脂斜面或其他适宜的培养基上,放37℃培育44~48小时为第1代。第1代菌须进行1∶500三胜黄素玻片凝集试验,只有光滑型菌方可用于制造菌苗。第1代菌种斜面于2~8℃可保存15日。

2.4 将第1代菌种接种到肝琼脂或其他适宜培养基上,放37℃培育44~48小时为第2代菌种。经肉眼纯菌检查合格后,弃去凝固水,用无菌生理盐水制成菌悬液。

2.5 将第2代菌种接种到琼脂或其他适宜培养基上,放37℃培育44~48小时,肉眼逐瓶检查,有杂菌者废弃。

2.6 用含有蔗糖明胶硫脲味精组成的保护液或其他适宜的保护液洗下菌苔或刮取菌苔,放入保护液内。每数瓶培养物可采入或刮入1瓶(或1大管)保护液内,此为菌苗原液,置2~8℃保存。每瓶(或大管)原液均按《生物制品无菌试验规程》进行纯菌试验。

2.7 将纯菌试验合格的原液合并,如每安瓿冻干菌苗为10人份,装量0.5ml原液,则应合并后的原液稀释成每ml含菌1800亿~2000亿,使每1人份菌苗含90亿~100亿。由原液采集到冷冻干燥之间隔不得超过7天。稀释后的原液经纯菌试验合格后即可分装安瓿冻干。

2.8 同一日采集的原液同一次冻干者为1批。如1批有数瓶,应分为亚批

2.3 冷冻干燥

菌苗原液分装安瓿完毕后应立即在-30℃以下进行冷冻。干燥时间可根据水分含量及活菌数来决定。干燥完毕后进行真空封口。亦可用充氮封口。

2.4 成品检定

4.1 物理化学检查

冻干菌苗应为乳白色疏松体,加入生理盐水后,应于1分钟内溶解成均匀悬液。用真空测定器检查安瓿应为真空。水分含量不得超过3%。

4.2 菌型检查

每亚批菌苗应用硫堇培养基或纸片法及硫化氢反应做菌型鉴别检查,应呈牛型布氏菌的培养特性。

4.3 纯菌试验

每亚批菌苗抽样按《生物制品无菌试验规程》进行。

4.4 活菌计数及菌落变异检查

每亚批取3支安瓿,加生理盐水溶解混匀后比浊。将菌液浓度稀释为含菌10亿/ml,再用生理盐水做10倍系列稀释至10-6,取10-6或其他适宜的稀释度之菌液接种5个平皿,每个平皿接种0.1ml。用涂菌棒涂匀后放37℃培育4~5天,计算活菌数。冻干后活菌率不得少于50%,如不合格可复试,经复试仍低于50%者则该批菌苗废弃。同时用结晶此菌落染色法检查,菌落变异率不得超过10%。

4.5 浓度测定

菌苗经溶解后,按中国细菌浊度标准测定浓度,每人份含菌数应为90亿~100亿。

4.6 安全试验

每亚批取3支安瓿,用生理盐水溶解后混匀。用体重18~20g小白鼠5只,每只皮下注射10亿菌/ml的菌悬液0.5ml。观察7日不应有死亡,如有死亡应复试一次,仍有死亡,则该批菌苗废弃。

4.7 免疫力试验

10批以下者至少抽1批进行免疫力试验,10批以上者,每10批抽1批。用灭菌生理盐水溶解冻干菌苗,并稀释成5亿菌/ml菌悬液。取体重300~350g豚鼠10只,每只皮下注射1ml。经25~30日后,每只豚鼠皮下攻击羊型线毒布氏菌10个或20个MID。同时用3组健康豚鼠作对照,每组3只,各组豚鼠分别于皮下注射0.5、1和2MID。各组不能自拔于注射毒菌悬液后25~30日解剖,取鼠蹊部淋巴结、腹主动脉旁淋巴结、肝及脾,分别接种肝琼脂中管斜面培养基,于37℃培育10天。如免疫动物组织之培养物有布氏菌生长,需用硫堇培养基(亦可用纸片法)和硫化氢反应做菌型鉴别试验。注射1个MID的3只对照豚鼠都必须发生全身感染,即肝脏或脾脏应分离出羊型毒菌。攻击10个MID时,10只免疫豚鼠中不应有3只以上分离出羊型毒菌;攻击20个MID时10只免疫豚鼠中不应有4只以上分离出羊型毒菌。

2.5 保存与效期

应保存于2~8℃暗处。自冻干后活菌数检定合格之日起效期为1年。

3 冻干皮上划痕人用布氏菌病活菌苗作用说明书

严禁注射!

本品系采用布氏菌弱毒菌种,经培育后冻干制成。用于预防布氏菌病。

本品为乳白色疏松体,加入生理盐水后,应于1分钟内溶解成均匀悬液。

3.1 接种对象

凡与布氏菌病传染源密切接触者,每年应免疫一次。布氏菌素反应阳性者可不予接种。

3.2 用法

1.使用前应仔细检查安瓿,安瓿不应有裂纹。

2.菌苗按所载人份量加入灭菌生理盐水溶解。每支安瓿10人份,加入0.5ml,溶解后之菌苗应3小时内用完。

3.上臂外侧上部皮上划痕接种。在接种处用酒精消毒,待干后,滴上菌苗(每人份0.05ml),再用消毒针划痕。10岁以下儿童及复种者菌苗滴于一处划一个“井”字,10岁以上初种者菌苗滴于二处划二个“井”字,间隔2~3cm,划痕长度1~1.5cm,应以划破表皮微见血迹为宜。划痕处用针涂压10余次,使菌液充分进入痕内。接种后局部应裸露至少5分钟。

3.3 禁忌

1.患严重疾病,免疫缺陷症者及用免疫抑制剂治疗者。

2.妊娠期,前6个月授乳期。

3.4 反应

接种后局部反应轻微,少数人划痕处会出现轻度浸润,一般不影响劳动。个别人体温稍有增高。如因使用途径错误,出现类似急性布氏菌病症状者,要按急性布菌病进行彻底治疗。

3.5 注意事项

1.本品仅供皮上划痕用,严禁注射。

2.安瓿有裂纹、标签不清、制品过期失效者不可使用。

3.6 保存

保存于2~8℃暗处。

4 参考资料

  1. ^ [1] . "《中国生物制品规程》".

分享到

编辑

词条冻干皮上划痕人用布氏菌病活菌苗banlang创建创建

分类

相关条目