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门冬酰胺酶(埃希)

1 拼音

mén dōng xiān àn méi (āi xī )

2 英文参考

Asparaginase (Escherichia)

3 门冬酰胺酶(埃希)药典标准

3.1 品名

3.1.1 中文名

门冬酰胺酶(埃希)

3.1.2 汉语拼音

Mendongxian'anmei (Aixi)

3.1.3 英文名

Asparaginase (Escherichia)

3.2 来源含量

品系大肠埃希菌(E.coli AS 1.357)中提取制备的具有酰胺基水解作用的酶。每1mg蛋白含门冬酰胺酶的活力不得低于250单位。

3.3 性状

本品为白色结晶性粉末;无臭,无味。

本品在水中易溶,在乙醇乙醚中不溶。

3.4 鉴别

(1)取本品5mg,加水1ml使溶解,加20%氢氧化钠溶液5ml,摇匀,再加1%硫酸铜溶液1滴,摇匀,溶液应显蓝紫色。

(2)取本品适量,加流动相A溶解并制成每1ml中约含1mg的溶液,作为供试品溶液;另取门冬酰胺酶(埃希)对照品,加流动相A溶解并制成每1ml中约含1mg的溶液,作为对照品溶液。照高效液相色谱法2010年版药典二部附录Ⅴ D)测定,以八烷基键合硅胶为填充剂(4.6mm×250mm),以0.05%三氟醋酸溶液为流动相A,三氟醋酸-40%乙腈溶液(0.5:1000)为流动相B;柱温40℃,流速为每分钟1ml;检测波长为220nm;按下表进行梯度洗脱。取供试品溶液和对照品溶液各20μl注入液相色谱仪,记录色谱图,供试品溶液色谱图中主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。

时间(分钟)

流动相A(%)

流动相B(%)

0

25

75

60

0

100

70

0

100

72

25

75

82

25

75

3.5 检查

3.5.1 酸碱度

取本品,加水溶解并制成每1ml中含10mg的溶液,依法测定(2010年版药典二部附录Ⅵ H),pH值应为6.5~7.5。

3.5.2 溶液的澄清度与颜色

取本品,加水溶解并制成每1ml中含5mg的溶液,依法测定(2010年版药典二部附录Ⅸ A和2010年版药典二部附录Ⅸ B),溶液应澄清无色。

3.5.3 纯度

取本品适量,加流动相溶解并制成每1ml中约含2mg的溶液,作为供试品溶液。照分子排阻色谱法(2010年版药典二部附录Ⅴ H)测定,以适合分离分子量为10000~500000球状蛋白的色谱用亲水改性硅胶为填充剂[1],以0.1mol/L磷酸缓冲液(pH 6.7)(磷酸二氢钠6.0g,磷酸氢二钠20.2g,加水900ml,用磷酸或氢氧化钠溶液调节pH值至6.7,加水至1000ml)为流动相,流速为每分钟0.6ml,检测波长为280nm。取20μl注入液相色谱仪,记录色谱图,按峰面积归一化法计算主峰相对百分含量,应不得低于97.0%。

3.5.4 干燥失重

取本品0.1g,置105℃干燥3小时,减失重量不得过5.0%(2010年版药典二部附录Ⅷ L)。

3.5.5 重金属

取本品0.5g,依法检查(2010年版药典二部附录Ⅷ H第二法),含重金属不得过百万分之二十。

3.5.6 常毒

取本品,加氯化钠注射液制成每1ml中含44000单位的溶液,取体重20g±1g的雄性小白鼠5只,分别自尾静脉注射0.5ml,给药后30分钟内不得出现呼吸困难抽搐症状

3.5.7 细菌内毒素

取本品,依法检查(2010年版药典二部附录Ⅺ E),每1单位门冬酰胺酶(埃希)中含内毒素的量应小于0.015EU。

3.5.8 降压物质

取本品,依法检查(2010年版药典二部附录Ⅺ G),剂量按猫体重每1kg注射1万单位,应符合规定

3.6 效价测定

3.6.1 酶活力

3.6.1.1 对照品溶液的制备

取经105℃干燥至恒重硫酸铵适量,精密称定,加水溶解并定量稀释制成0.0015mol/L的溶液。

3.6.1.2 供试品溶液的制备

取本品约0.1g,精密称定,加磷酸盐缓冲液(取0.1mol/L磷酸氢二钠溶液适量,用0.1mol/L磷酸二氢钠溶液调节pH值至8.0)溶解并定量稀释制成每1ml中约含门冬酰胺酶(埃希)5单位的溶液。

3.6.1.3 测定法

取试管3支(14cm×1.2cm),各加入用上述磷酸盐缓冲液配制的0.33%门冬酰胺溶液1.9ml,于37℃水浴中预热3分钟,分别于第一管(t0)中加入25%三氯醋酸溶液0.5ml,第2、3管(t)中各精密加入供试品溶液0.1ml,置37℃水浴中,准确反应15分钟,立即于第一管(t0)中精密加入供试品溶液0.1ml,第2、3管(t)中各加入25%三氯醋酸溶液0.5ml,摇匀,分别作为空白反应液(t0)和反应液(t)。精密量取t0、t和对照品溶液各0.5ml置试管中,各加水7.0ml及碘化汞钾溶液(取碘化汞23g、碘化钾16g,加水至100ml,临用前与20%氢氧化钠溶液等体积混合)1.0ml,混匀,另取试管一支,加水7.5ml及碘化汞钾溶液1.0ml作为空白对照管,室温放置15分钟,照紫外-可见分光光度法(附录Ⅳ A),在450nm的波长处,分别测定吸光度A0、At和AS,以At的平均值,按下式计算:

式中  5为反应常数

F为对照品溶液浓度的校正值。

效价单位定义:在上述条件下,一个门冬酰胺酶单位相当于每分钟分解门冬酰胺产生1μmol氨所需的酶量。

3.6.2 蛋白质含量

取本品约20mg,精密称定,照蛋白质含量

测定法(2010年版药典二部附录Ⅶ M第一法)测定,即得。

3.6.3 比活

每1mg蛋白中含门冬酰胺酶活力的单位。

3.7 类别

抗肿瘤药

3.8 贮藏

遮光密封,冷处保存

3.9 制剂

注射用门冬酰胺酶(埃希)

3.10 版本

中华人民共和国药典》2010年版

4 参考资料

  1. ^ [1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:2010年版:第一增补本[M].北京:中国医药科技出版社,2010.

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