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伤寒、副伤寒甲二联菌苗

1 拼音

shāng hán 、fù shāng hán jiǎ èr lián jūn miáo

2 伤寒、副伤寒甲二联菌苗制造及检定规程

[1]品系伤寒副伤寒甲菌培育后取菌苔制成悬液,加甲醛杀菌,以磷酸盐缓冲生理盐水稀释成每ml含伤寒1.5亿菌,副伤寒甲1.5亿菌制成。用于预防伤寒、副伤寒甲。

2.1 菌种

1.1 菌种来源

制造伤寒、副伤寒甲二联菌苗用的菌种及检定菌种用的诊断血清,应由中国药品生物制品检定所分发或经同意。

1.2菌种检定

检定菌种可用pH7.2~7.4的肉汤琼脂、马丁琼脂或其他适宜的培养基

1.2.1培养特性

制造菌苗的菌株应具有的典型的形态、培养和生化特性。

1.2.2血清凝集试验

用37℃培养18~20小时的培养物以磷酸盐缓冲生理盐水稀释成含菌6亿/ml,与相应的伤寒、副伤寒甲菌诊断血清作定量凝集试验,摇匀后37℃过夜,以肉眼见到凝集(+)之血清最高稀释度为凝集反应效价。凝集价不应低于血清原效价之半。并用伤寒Vi及O血清做凝集试验,应与Vi血清有凝集,与O血清不凝集,或仅有较低凝集。

1.2.3毒力试验

用37℃培育12~16小时的琼脂培养物以生理盐水稀释,伤寒稀释成6亿/ml、3亿/ml、1.5亿/ml及0.75亿/ml,副伤寒甲稀释成15亿/ml、7.5亿/ml及3.75亿/ml等浓度的菌液(根据菌种毒力情况可作更改也可增加稀释度)。

第一稀释度菌悬液腹腔注射体重14~16g小白鼠至少5只,每只0.5ml,观察3天,使小白鼠于感染后3天内全部死亡的最小剂量为1个致死量(LD),伤寒菌种1LD应不超过1.5亿菌,副伤寒甲菌种不超过7.5亿菌。

1.2.4毒性试验

用37℃培育18~20小时琼脂培养物混悬于磷酸盐缓冲生理盐水内,56℃加温1小时(或其他方法杀菌),不加防腐剂。杀菌试验合格后稀释成每ml含菌60、30及15亿共3个浓度,每一浓度的菌悬液以0.5ml腹腔注射体重15~18g小白鼠5只,观察3天,注射7.5亿菌之小白鼠应全部生存,注射15亿菌的5只小白鼠可有3只死亡。

1.2.5免疫力试验

按《伤寒、副伤寒甲、乙三联菌苗制造及检定规程》1.2.5项进行。

1.2.6抗原性试验

选体重2kg左右之健康家兔至少3只,用免疫力试验所用之菌液静脉注射3次,每次0.5ml,第1次注射7亿菌,第2次14亿菌,第3次21亿菌,每次间隔7天。末次注射后10~14天采血做定量凝集试验测定效价。伤寒菌免疫的血清对免疫菌效价应不低于1∶12800,副伤寒甲效价不低于1∶6400,2/3家兔血清之凝集价达上述要求即为合格。

1.3菌种保存

菌种应冻干保存,冻干菌种保存于2~8℃。

菌种冻干后应抽取样品按1.2.2项进行检查,合格后可使用3年。以后每次生产前必须检查全部特性一次,合格者可继续使用2年。

2.2 菌苗制造

制造伤寒、副伤寒甲二联菌苗所用的每一菌种选用2个菌株。

2.1菌种

冻干菌种启开后检查菌形、纯度及进行玻片凝集试验(伤寒菌加用Vi血清),合格后即可使用。每启开1支冻干菌种用于生产不超过6代。

2.2制造用培养基

用pH7.2~7.4的马丁琼脂或其他适宜的培养基。

2.3原液制造

2.3.1接种

采用涂种,接种后置37℃培育18~24小时。

2.3.2采集

采集前应逐瓶检查,有杂菌者废弃。刮取菌苔混悬于磷酸盐缓冲生理盐水中。

2.3.3纯菌试验

原液采集后应逐瓶取样接种琼脂斜面1管,于37℃培育2天,24~26℃1天,有杂菌生长应废弃。

2.3.4杀菌

原液用甲醛溶液杀菌,各种原液加入甲醛溶液浓度如下:

伤寒菌原液不超过1.1%±0.1%(ml /ml)。

副伤寒甲菌原液不超过1.4%±0.1%(ml /ml)。

杀菌剂后的原液应放在37℃,不得超过7天,以后保存于2~8℃。

2.3.5无菌试验

纯菌试验合格的原液,应取样接种不含琼脂的硫乙醇酸盐培养基及普通琼脂斜面各1管,放37℃培育5天,有本菌生长,可加倍量复试一次;有杂菌生长应废弃。

2.3.6原液合并

无菌试验合格之原液,安不同菌株或不同制造日期分别过滤合并,合并后应加不超过0.5%(g/ml)的苯酚或其他适宜之防腐剂,保存于2~8℃。

2.4原液检定

2.4.1镜检

菌形应正常,无杂菌。

2.4.2凝集试验

原液与相应血清进行凝集试验,其凝集效价不应低于血清原效价之半。

2.4.3无菌试验

按《生物制品无菌试验规程》进行。

2.4.4浓度测定

应按中国细菌浊度标准与质量检定部门会同测定浓度。

2.4.5免疫力试验

原液于无菌试验合格后与质量检定部门会同进行。抽验批数应不少于生产批数的1/5。方法同1.2.5项,唯所用小白鼠每组至少15只。对伤寒或副伤寒甲毒菌之攻击,均应保护60%小白鼠活存为合格。

2.5原液保存

原液应保存于2~8℃。原液自采集之日起至用于菌苗稀释时不得少于4个月,保存效期自采集之日起为2年半。

2.6菌苗稀释

2.6.1原液配合

稀释前应先将不同菌种所制之原液按比例配合。每一种菌所加的菌数与应加菌数在总菌数不变的原则下,允许两种菌之间在20%的范围内互有增减;同一种菌不同菌株之原液按等量混合,但每个菌株所加的菌数与应加菌数在总菌数不变的原则下,允许两个菌株之间在40%范围内互有增减。

2.6.2菌苗稀释

稀释菌苗用含0.25%~0.5%(g /ml)苯酚或其他适宜的防腐剂之磷酸盐缓冲生理盐水。

2.6.3菌苗浓度

菌苗每ml含伤寒菌1.5亿,副伤寒甲菌1.5亿。

2.7菌苗分批

同组配合的原液用同批稀释液在同一日稀释的各瓶菌苗为1批。大罐稀释时应按大罐分批,并按分装机分为亚批

2.8检定

稀释后每批应逐瓶抽样进行无菌试验及测定防腐剂含量(大罐稀释时除外)。

2.9分装

分装后应每亚批抽样送质量检定部门进行成品检定。

2.3 成品检定

3.1物理化学检查

菌苗应为乳白色悬液,pH值为6.8~7.4。不应有摇不散的菌块或异物。苯酚含量应为0.25%~0.5%(g /ml)。

3.2菌形及纯度

染色镜检,应为革兰氏阴性杆菌。至少观察10个视野,平均每个视野内不得有10个以上非典型菌(线状、粗大或染色可疑杆菌),并不应有杂菌。

3.3无菌试验

按《生物制品无菌试验规程》进行。

3.4安全试验

3.4.1毒性试验

用体重18~20g之健康小白鼠5只,每只腹腔注射菌苗0.5ml,或用体重350~450g之健康豚鼠2只,腹腔注射菌苗1.5ml,观察7日,应无死亡。

3.4.2防腐剂试验

用体重18~20g之健康小白鼠2只,每只皮下注射菌苗0.5ml,用苯酚作防腐剂的菌苗注射的小白鼠可发生战栗症状,但不应超过半小时,观察7日不得有局部脓肿或死亡。

2.4 保存与效期

应保存于2~8℃。自稀释之日起效期为1年半。如原液保存超过1年稀释,应相应缩短效期(自原液采集之日起总效期不得超过2年半)。

3 伤寒、副伤寒甲二联菌苗使用说明

本品系用伤寒、副伤寒甲菌分别培育,取菌苔制成悬液经甲醛杀菌,以磷酸盐缓冲生理盐水稀释制成。用于预防伤寒、副伤寒甲。

本品为乳白色的混悬液,含苯酚防腐剂,不应含有异物或摇不散的凝块。

3.1 接种对象

重点使用于部队、港口、铁路沿线工地的工作人员,下水道、粪便、垃圾处理人员,饮食行业、医务防疫人员及水上居民,或有本病流行地区的人群。

3.2 用法

1.于上臂外侧三角肌附着处皮肤消毒后皮下注射。

2.初次注射本菌苗者,需注射3次,每次间隔7~10天。注射剂量如下:

1~6周岁:第1针0.2ml,第2针0.3ml,第3针0.3ml。

6周岁以上~14周岁:第1针0.3ml,第2针0.5ml,第3针0.5ml。

14周岁以上:第1针0.5ml,第2针1.0ml,第3针1.0ml。

3.3 禁忌

1.发热,严重心脏病,高血压,肝、肾脏病及活动结核

2.孕妇,月经哺乳期

3.有过反应病史者。

3.4 注意事项

1.用前摇匀。安瓿有裂纹,有异物、摇不散的凝块或曾经冻结者都不能使用。

2.应备有1∶1000肾上腺素,以供偶有发生休克时急救之用。

3.5 反应

局部可出现红肿,有时全身有寒热头痛

3.6 保存

保存于2~8℃暗处。

4 参考资料

  1. ^ [1] . "《中国生物制品规程》".

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