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血清免疫球蛋白A

1 拼音

xuè qīng miǎn yì qiú dàn bái A

2 英文参考

Serum immunoglobulin A

3 概述

IgA血清免疫球蛋白总量10%~20%,可分为血清型和分泌型。分泌型IgA是外分泌液(如初乳唾液、眼泪、肠道分泌液和支气管分泌液)中的主要免疫球蛋白。因此,其在抗感染防御第一线中起重要作用,尤其在呼吸道和肠道,可称为“局部免疫”。

4 血清免疫球蛋白A的医学检查

4.1 检查名称

血清免疫球蛋白A

4.2 分类

免疫学检查 > 血清免疫球蛋白测定

4.3 取材

血液

4.4 血清免疫球蛋白A的测定原理

(1)单向免疫扩散法:将被检血清做一定倍数的稀释,加入抗体琼脂板的孔内,让其自由扩散,当抗原抗体比例适当,出现白色沉淀环。其直径与抗原(IgG、IgA、IgM)浓度的对数成直线关系。查标准曲线,乘以稀释倍数即得免疫球蛋白的含量。

(2)免疫比浊法

①透射比浊法:抗原与抗体在比例合适(抗体必须过量)时,形成免疫复合物(IC),后者在PEG等作用下,在液相中形成微粒。当抗体浓度固定时,IC的量与检样中抗原的量成正比,测其吸光度可间接反映抗原的含量。

②终点散射比浊法:抗原和相应抗体结合后,经一定时间形成复合物,用散射比浊仪,测定复合物散射光强度,间接反映抗原含量。

4.5 试剂

(1)单向免疫扩散法:

①0.12mol/L pH 8.6巴比妥缓冲液

②10g/L 0.12mol/L pH 8.6巴比妥琼脂。

③抗人IgG、IgA、IgM血清和参考标准血清,生物制品所供应。

④5ml/L过氧乙乙乙酸

⑤8cm×14.5cm,厚3mm的玻璃板或按本单位检验数量设计数块,洗净后干燥备用。

⑥“凹”型模板:自制用厚5mm、长14.5cm,宽8cm的玻璃丝层压板或电木制成,呈“凹”型,边宽1cm,中间部分去掉即成。也可用生物制品所出售的成品塑料模板。

⑦打孔器:为金属圆筒,内径3mm。

⑧铁夹子或文具夹1套3只。

(2)免疫比浊法:

①透射比浊法:包括:抗血清(要求高效价、高纯度、高亲和力,且不含任何干扰粒子);参考品(采用国际参考品或经其标化的参考品);缓冲液(各仪器常有指定缓冲液)。

②终点散射比浊法:免疫比浊仪配有IgG、IgA、IgM、C3、C4试剂盒,内含稀释液、缓冲液、抗血清等,按说明书配制。

4.6 操作方法

(1)单向免疫扩散法:

①抗体琼脂板的制备:将“凹”型模板夹于两块玻璃板之间,在玻璃板左、右、下各用铁夹1只夹紧。将上述加热融化的10g/L琼脂分装3支试管,每管14.7ml,然后移入56℃水浴中,待试管内温度降至56℃后,分别加入上述抗人IgG、IgA、IgM血清(例如其抗血清效价为1∶50,即各管分别加入0.3ml抗人IgG、IgA、IgM血清),使其最终稀释倍数符合瓶签所标单扩散效价,混匀后,分别倒入模板内(要迅速,防止琼脂凝固)。冷却后,取去上层玻璃及模板,即得平整均匀的抗体琼脂板。

②打孔:取打孔器在抗体琼脂板上相距15mm(孔中心至孔中心)打孔,用针头挑去孔内的琼脂,孔边要求圆而规整,无缺损,无毛刺。有现货供应,可供选用。

③参考血清的稀释。

A.取14支试管并编号2-15。

B.第2管加入生理盐水0.1ml,从第3管起至第15管中加生理盐水0.2ml。

C.取冻干参考血清1支(标明0.5ml),先加蒸馏水0.5ml溶解后再加生理盐水0.25ml,混匀后1∶1.5倍稀释基础液作第1管。

D.从第1管中先取0.3ml加入第2管,再取0.2ml加入第3管。

E.用0.2ml吸管从第2管内吸出0.2ml加入第4管,混匀后再吸出0.2ml加入第6管……,以此类推跳管稀释至14管。另用0.2ml吸管从第3管内吸出0.2ml加入第5管,混匀后再吸0.2ml加入第7管……,以此类推跳管稀释至15管。如此稀释后各管中参考血清稀释倍数分别为1.5、2、3、4、6、8、12、16、24、32、48、64、96、128、192。

从第1、3、5、7、9管取样作IgM标准曲线。从第4、6、8、10、12管取样作IgA标准曲线。从第7、9、11、13、15管取样作IgG标准曲线。

F.以8310参考血清为例,经如上稀释3种Ig各5管的含量与被检标本的稀释倍数见表1。

有的参考血清是以U/ml(即国际单位/ml)来表示,它与g/L的换算关系如下:

IgG:1U/ml=0.0804g/L;IgA:1U/ml=0.0142g/L;IgM:1U/ml=0.00847g/L;IgD:1U/ml=1.41mg/L。

④待检血清的稀释:取3支试管,分别标明IgG、IgA、IgM,然后依次加入生理盐水0.49ml、0.45ml、0.4ml。用微量注射器取待检血清10μl加于IgG试管中,取50μl加于IgA试管内,取100μl加于IgM试管内,混匀。待检IgG、IgA、IgM的稀释度则分别为1∶50、1∶10、1∶5。

⑤加样:取IgG、IgA、IgM不同浓度的参考血清分别在IgG、IgA、IgM抗体琼脂板上各加3孔,每孔10μl。稀释的待检血清在三块抗体琼脂板上每个标本各加2孔,每孔10μl。

⑥将加好样的抗体琼脂板先放在水平的桌面上30min左右,再移至有盖湿盒内,置37℃水箱内,IgG、IgA孵育24h,IgM孵育48h,观察结果。如沉淀环不明显,可用生理盐水浸泡1h,中间换2次生理盐水,再用5ml/L过氧乙乙乙酸浸泡10min。

⑦读取结果:可用放大器,菌落计数器或用精度0.1mm游标卡尺,准确地测量沉淀环直径,分别量出参考血清各浓度和被检血清之平均直径。

⑧绘制标准曲线:在半对数纸上以参考血清含量为横坐标,各浓度平均沉淀环(直径一孔径)2为纵坐标绘制曲线。若几个点不在一条直线上,相差较大,应查找原因后重新测定。若几个点基本在一条线上,可经统计回归方程计算后画成一条标准曲线。

⑨以待检血清的沉淀平均直径(直径-孔径)2在标准曲线中查出其浓度,再乘以稀释倍数,即为IgM、IgA、IgG结果,以g/L报告之。

(2)免疫比浊法:

①透射比浊法:

A.抗血清浓度选择:与参考品进行方阵滴定,最适稀释度的原则为:保持抗体过量,线性范围较宽,与相应Ig反应后产生浊度较高。

B.标准曲线:将Ig参考品用稀释液稀释成不同浓度:IgG 5.0、9.0、13.0、17.0、21.0g/L;IgA 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0g/L;IgM 0.5、1.2、1.9、2.6、3.3g/L。每个稀释度设3支复管,每管25μl。加入最适稀释度抗血清,每管2.5ml。37℃水浴1h(IgG)或2h(IgA、IgM)后,用浊度计或比色计在495nm测吸光度。以Ig浓度为横坐标,其吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

C.标本检测:检测步骤与制备标准曲线相同。测IgG时,待检血清1∶40稀释;测IgA、IgM时1∶5稀释。每批试验同时制标准曲线,并设标本对照(标本加稀释液)和抗血清对照。

②终点散射比浊法:用专用比浊管加入缓冲液0.6ml、1∶36(测IgG、IgA、IgM、C3、C4等)或1∶216(测IgG)稀释样品50μl,再加入抗血清50μl,混匀后37℃水浴30min。用激光免疫比浊仪,按预测项目(如IgG或IgA)键,以空白管(不加抗血清)调零,按测定键,测定各管,即显示所测项目含量。

4.7 正常值

免疫比浊法、放射免疫扩散法(RID法):

脐带:      0~50  mg/L       (0~5mg/dl)

新生儿:    0~22  mg/L       (0~2.2mg/dl)

0.5~6个月:30~820 mg/L      (3~82mg/dl)

6个月~2岁:140~1080mg/L     (14~108mg/dl)

2~6岁:   230~1900mg/L      (23~190mg/dl)

6~12岁:  290~2700mg/L      (29~270mg/dl)

12~16岁: 810~2320mg/L      (81~232mg/dl)

成人:     760~3900mg/L      (76~390mg/dl)

4.8 化验结果临床意义

(1)升高:IgA型多发性骨髓瘤系统性红斑狼疮SLE)、结节病类风湿性关节炎、白塞氏(Behcet)综合征、门静脉肝硬化、某些感染性疾病、湿疹血小板减少症、Wiskott-Aldrich综合征(湿疹血小板减少多次感染)、慢支缓解期等。分泌型IgA介于500~2500mg/L则病情重,病程长者<500mg/L。脐带血IgA升高:风疹单纯疱疹弓形体病巨细胞病毒柯萨奇病毒、革兰氏阴性杆菌宫内感染等。

(2)降低:遗传毛细血管扩张症(80%)、非IgA型多发性骨髓瘤、重链病、轻链病、吸收不良综合征原发性无丙种球蛋白血症继发性白血症、继发性无丙种球蛋白血症、继发性免疫缺陷病(放射线照射、使用免疫抑制剂)、反复呼吸道感染输血反应自身免疫性疾病肾病综合征慢性淋巴细胞白血病霍奇金病、遗传性胸腺发育不全、丙种球蛋白异常血异常血症Ⅲ型、丙种球蛋白异常血异常血症Ⅰ型(IgG、IgA减低、IgM增加)、丙种球蛋白异常血异常血症Ⅱ型(无IgA、IgM,IgG正常)等(表2)。

4.9 附注

IgA不能通过胎盘,故初生婴儿易患呼吸道和肠道感染。出血后4~6个月,才开始合成IgA,以后逐渐升高,青少年时达成人水平。

4.10 相关疾病

多发性骨髓瘤、系统性红斑狼疮、红斑狼疮、结节病、类风湿性关节炎、肝硬化、湿疹、风疹、单纯疱疹、弓形体病、重链病、肾病综合征、慢性淋巴细胞白血病、霍奇金病

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