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血清尿素

1 拼音

xuè qīng niào sù

2 英文参考

Urea,ure

3 概述

尿素(Urea,ure)是哺乳动物蛋白质分解代谢的终产物。在肝脏通过鸟氨酸循环合成,主要由肾脏排泄。由于尿素的分子量小又易于溶解扩散力极大,故脑脊液浆膜腔积液、唾液汗液中的尿素浓度基本一致。血尿素浓度主要受肾功能蛋白质摄入量分解代谢情况的影响。目前临床实验室测定尿素最常用的方法有二乙酰-肟法,酶偶联速率法。

4 血清尿素医学检查

4.1 分类

血液生化检查 > 氨基酸、氮化物、有机酸测定

4.2 取材

血液

4.3 原理

(1)二乙酰-肟法:二乙酰-肟与强酸作用生成二乙酰,后者与尿素在酸性条件下,缩合成红色的二嗪衍生物。试剂中的硫氨脲和硫酸镉具有增色和稳定作用。

(2)酶偶联速率法:尿素在尿素酶作用下水解成NH4和CO2,NH4、NADH和α-酮戊二酸谷氨酸脱氢酶作用下生成CO2谷氨酸和NAD。由于NADH被氧化成NAD,在340nm吸光度降低,其吸光度降低值与尿素浓度成正比。

4.4 试剂

(1)二乙酰-肟法:

①酸性试剂:加蒸馏水约100ml于1000ml三角烧瓶中,然后加入浓硫酸44ml及85%磷酸66ml,冷至室温后,加入硫氨脲50mg及硫酸镉(CdSO4·8H2O)2g,充分溶解后用蒸馏水稀释至1000ml,置棕色试剂瓶中放冰箱保存,此试剂可稳定6个月。

②二乙酰-肟溶液:称取二乙酰-肟20g,加蒸馏水约900ml,溶解后,用蒸馏水稀释至1000ml,置棕色瓶中放冰箱保存,可稳定6个月。

③尿素标准应用液(70mmol/L):精确称取干燥纯尿素0.420g,溶于20ml无氨蒸馏水中。并加至100ml,加0.1g叠氮钠防腐,放冰箱可稳定6个月。

④尿素标准应用液(7.0mmol/L):取10ml尿素标准应用液,用无氨蒸馏水稀释至100ml即可。

(2)酶偶联速率法:目前各厂家所产试剂盒并不完全相同。缓冲液多用0.1mol/L(pH7.5±0.1)的磷酸盐缓冲液。α-酮戊二酸5mmol/L,NADH 3.5mmol/L,尿素酶15000U/L,谷氨酸脱氢酶2000U/L,ADP 2mmol/L。

4.5 操作方法

4.5.1 二乙酰-肟法

①试管分别标明空白管“B”、测定管“U”、标准管“S”。

②分别于测定管加血浆(清)20μl,标准管加标准应用液20μl,空白管加蒸馏水20μl。

③各加酸性试剂3ml、二乙酰-肟试剂3ml。

④充分混匀,煮沸加热10min,取出、冷却。

⑤520nm波长,空白管调零比色、读取标准管及测定管吸光度。

附注:

①尿素不能直接与二乙酰-肟反应,加入二乙酰-肟和强酸的目的是生成能与之反应二乙酰。加入Fe3(或Cd2)是为消除反应过程中生成的羟胺干扰,硫氨脲可使反应的敏感度提高20倍。以前许多书刊介绍的方法是将二乙酰-肟与硫氨脲配在一起。但两者可生成针状黄色物质,用硫氨脲配在酸试剂中克服了这一缺点。

②酸浓度与吸光度呈正相关,故酸浓度要准确。所用试管口径,放入沸水中的倾斜角度要尽量一致,水液面要在试管内液面之上,煮沸时间以放入试管重新沸腾计。最好每次测定标准和质控。观察尿素动态变化时,应嘱患者恒定食入蛋白,并空腹采血样本不能立即分析时,可提取血清(或血浆)于密封样杯中,置4℃存放可稳定7天。结果大于20mmol/L时,样本改为10μl,结果乘以2。

③此法虽然加入硫氨脲和镉离子,在一定程度上增进了显色强度和色泽稳定性,但仍有褪色现象(每小时约5%),所以,煮沸加热显色冷却后,应及时比色。

④所用20μl加样器务必校正无误后方可使用。

⑤血浆(清)中尿酸、肌酐、氨基酸等含氮物对本试验无干扰,溶血可能结果偏高,黄疸可能结果偏低。

⑥血浆(清)尿素含量与进食的蛋白质含量有密切的关系。在高蛋白饮食时,血浆(清)中的尿素含量可明显升高,而低蛋白饮食时,则含量显著降低。

4.5.2 酶偶联速率法

试剂样品比为70∶1,37℃,340nm,延滞时间30s,读数时间30s。具体分析条件可据试剂盒和仪器的说明书确定,最好每次定标。

附注:

①该法最常出现的问题是试剂失效或反应系统污染。试剂中最不稳定的是NADH和谷氨酸脱氢酶。在分析过程中应注意以下几个方面:如用血浆则不能用含氟化合物或NH4抗凝剂,前者可抑制尿素酶活性,后者则可参与反应。

试剂空白吸光度应大于1.2A,否则说明NADH被氧化。同种试剂、仪器,在分析条件不变的情况下,测定得F值应相对恒定,否则说明试剂失效。

③复溶试剂勿振动,以免酶变性失活。必须用无氨水复溶试剂。试剂杯、样品杯、反应杯要无氨、洁净、无酸碱污染,应每次定标,并跟测质控血清

4.6 正常值

(1)二乙酰-肟法:2.0~7.1mmol/L。

(2)酶偶联速率法:2~7.1mmol/L。

4.7 临床意义

(1)增高:

①肾脏疾病:如急性肾衰慢性肾炎、肾动脉硬化慢性肾盂肾炎肾结核肾肿瘤晚期等,肾功能轻度受损时,BUN可无变化。当60%~70%有效肾单位受损时,BUN才增高。因此BUN测定不能作为早期肾功能受损的指标,但对肾功能衰竭,尤其是尿毒症诊断有特殊价值,并可判断病情,估计预后。根据BUN测定结果可判断肾功能衰竭的程度。A.肾功能衰竭代偿期:Ccr下降,血Cr正常。BUN正常或轻度升高(<9mol/L)。B.肾功能衰竭失代偿期(氮质血症期或尿毒症前期):Ccr明显下降(<0.83ml/s),血Cr增高(>90mmol/L),BUN中度升高(>9mmol/L)。C.尿毒症期:Ccr<0.33ml/s,血Cr>445μmol/L,BUN>20mmol/L。

②肾前性或肾后性因素引起尿量显著减少或尿闭,如剧烈呕吐腹泻引起的脱水水肿腹水循环功能衰竭,以及尿路结石、前列腺肥大、肿瘤等引起的尿路梗阻

③体内蛋白质分解过多,如大面积烧伤、大手术以后,上消化道出血甲状腺功能亢进及急性传染病等。此时BUN增高,而其他肾功能试验结果大致正常。

(2)降低:临床较少见。主要系肝实质受损,生成减少。如急性黄色肝萎缩肝硬化中毒性肝炎,严重贫血等。

4.8 相关疾病

慢性肾盂肾炎、肾结核、腹泻、脱水、腹水、烧伤、肝硬化、黄疸

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