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血小板抗原鉴定

1 拼音

xuè xiǎo bǎn kàng yuán jiàn dìng

2 操作名称

血小板抗原鉴定

3 用品及准备

待检血小板悬液,已知血小板抗体血清离心机,U型96孔反应板,福马林,聚山梨酯 20,胎牛血清,兔抗人IgG,IgG抗D致敏红细胞

4 方法及内容

1.将ACD-A与新鲜待检血液按1:7混匀,以800r/min离心10-15min,获得富含血小板血浆后加入该血浆量的1/10 ACD混匀,再以3000r/min离心15min,取压积血小板用生理盐水洗涤2次,最后配成100×109/L血小板悬液。

2.取U型反应板每孔加入25μl血小板悬液,水平振荡15s以1500r/min离心反应板5min,然后加入50μl 8%-12%的福马林 (pH7.2磷酸缓冲液稀释甲醛),室温温育固定20min,然后取出反应板,用生理盐水洗涤5—6次。

3.每个反应孔加入已知血小板抗体的血清25μl,置于室温混匀温育1h,用0.05%聚山梨酯20PBS洗涤反应板6次,每个孔内加入兔抗人IgG25μl,温育30min,加入1%抗D致敏红细胞25μl,反应板置于湿盒内静置2h后或次日观察结果。

5 注意事项

离心时温度不能太高,以免破坏血小板抗原性;操作台上应加湿布,以防静电干扰;反应板温育过程中,应置于湿度适合的环境中,以防孔内干涸影响结果判读。

6 结果判读

U型反应板底部红细胞呈均匀散在的膜状者为阳性,表示待检血小板含有与加入已知血小板抗体相对应的血小板抗原,若红细胞沉积在反应板底部为阴性,表示待检血小板不含加入抗体相对应的抗原。

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