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血型物质检测

1 拼音

xuè xíng wù zhì jiǎn cè

2 操作名称

血型物质检测

3 用品及准备

5%A、B、O和Le(a+b-)红细胞悬液,与待检者相同,标化的抗A抗B、抗H、抗Lea血清,已知的分泌型和非分泌型唾液,其A、B、O型与待检者相同。烧杯或粗口试管、煮锅等,其他材料同ABO血型鉴定

4 方法及内容

4.1 唾液的留取

①将自然流出的唾液5—10ml盛入干燥清洁的容器(小烧杯、三角瓶或粗口试管等)内,在水浴中煮沸10min(以灭活能使血型物质不活化的唾液酶,同时也破坏常见存在于唾液中的抗A及抗B)。②以3000r/min离心10min,留取上清液备用,弃去不透明的半固态物质。

4.2 试剂血清修正液的制备

①取小试管分成4排,每排5支,分别标明第1排A1~A5,第2排B1~B5,第3排H1~H5,第4排Lea1~Lea5。②各排从第2管开始,每管加生理盐水0.1ml。③第1—4排的第1和第2管分别加抗A、抗B、抗H及抗Lea血清0.1ml,从第2管开始倍量稀释。④于第1排各管加2%-5%的A型红细胞盐水悬液0.1ml;第2排各管加2%-5%的B型红细胞盐水悬液0.1ml;第3排各管加2%-5%的O型红细胞盐水悬液0.1ml;第4排各管加2%-5%的Le(a+b-)型红细胞盐水悬液0.1ml。⑤振摇试管架使之混匀,置室温lh后观察结果。每排以出现"4+”凝集的最高稀释度为最适稀释度。

4.3 唾液中血型物质的检测

(1)准备唾液做阳性阴性对照。对ABH分泌者,使用已知Se(分泌型)和sese(非分泌型)人的唾液。对Lewis分泌者,使用Lea阳性和Lea阴性人的唾液。可以用对红细胞试验的结果来选择这些对照。阳性对照应该有Le(a+b-)的红细胞,阴性对照应该有Le(a-b-)的红细胞。试剂对照用生理盐水。

(2)取4支试管,对ABH试验分别标明待检者、分泌型、非分泌型和生理盐水。对Lewis试验分别标明待检者、Lewis阳性、Lewis阴性和生理盐水。

(3)按标记分别加入最适稀释度抗血清1滴。

(4)在相应的试管中加入唾液1滴,在对照管中加入生理盐水1滴。

(5)混合后在室温孵育30min,中和抗体。

(6)每管中加入5%已洗涤并与抗体相对应的红细胞悬液1滴。

(7)混合后置室温孵育1h或15min后,以3000r/min离心15s,观察结果。

结果判读:先看对照,分泌型对照应不凝集,非分泌型应凝集。待检者若不凝集为分泌型,凝集为非分泌型。Lewis试验,先看对照,阳性对照应不凝集,阴性对照凝集。待检者不凝集为阳性,凝集者为Lea阴性。

4.4 血型物质效价测定

(1)取小试管10支,依次编号。第2~10管各加入生理盐水0.1ml。

(2)第1、2管各加入待检者唾液0.1ml,从第2管开始倍比稀释,第10管为对照管。

(3)每管加相应的经修正过的试剂血清(待检者为A型,则用抗A;B型用抗B;O型用抗H;AB型用抗A和抗B;Lea+用抗Lea0.1ml,混匀后,置室温(20℃)30min。

(4)每管再加入与待检者同型的5%红细胞悬液一滴,混合后放置室温(20℃)1h,观察结果。

(5)结果判读:先看对照的第10管,然后依次看1—9管,以抑制红细胞凝集的最后一管的稀释倍数为该唾液中血型物质的效价。

(6)注意事项:①漱口后留取唾液,以免食物残渣混入;②为增加唾液分泌,待检者可嚼蜡、石蜡膜或橡皮条,但不能嚼口香糖或其他含糖或蛋白质的食品;③如果当日试验用,血型物质可置4℃冰箱保存;如果暂时不用,可置低温冰箱冰冻保存,可保留其活性几年;④每次试验最好备有分泌型和非分泌型唾液作对照。

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