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2010年版药典一部附录Ⅺ

目录

1 拼音

2010 nián bǎn yào diǎn yī bù fù lù Ⅺ

中华人民共和国药典》2010年版一部 附录Ⅺ

2 附录Ⅺ A溶液颜色检查法

药物溶液的颜色及其与规定颜色的差异能在一定程度上反映药物的纯度。本法系将药物溶液的颜色与规定的标准比色液相比较,或在规定的波长处测定其吸光度,以检查其颜色。品种项下规定的“无色或几乎无色”,其“无色”系指供试品溶液的颜色与所用溶剂相同,“几乎无色”系指浅于用水稀释1倍后的相应色调1号标准比色液。

2.1 第一法

除另有规定外,取各品种项下规定量的供试品,加水溶解,置于25ml的纳氏比色管中,加水稀释至10ml。另取规定色调和色号的标准比色液10ml,置于另一25ml的纳氏比色管中,两管同置白色背景上,自上向下透视,或同置白色背景前,平视观察;供试品管呈现的颜色与对照管比较,不得更深。如供试品管呈现的颜色与对照管的颜色深浅非常接近或色调不尽一致,使目视观察无法辨别二者的深浅时,应改用第三法(色差计法)测定,并将其测定结果作为判定依据。

2.1.1 比色用重铬酸钾

精密称取在120℃干燥恒重基准重铬酸钾0.4000g,置500ml量瓶中,加适量水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得。每Iml溶液中含0.800mg的K2Cr2O7。比色用硫酸铜液 取硫酸铜约32.5g,加适量的盐酸溶液(1→40)使溶解成500ml,精密量取10ml,置碘量瓶中,加水50ml、醋酸4ml与碘化钾2g,用硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)滴定,至近终点时,加淀粉指示液2ml,继续滴定至蓝色消失。每1ml硫代硫酸钠滴定液(0.1mol/L)相当于24.97mg的CuSO4·5H2O。根据上述测定结果,在剩余的原溶液中加适量的盐酸溶液(1→40),使每1ml溶液中含62.4mg的CuSO4·5H2O,即得。

2.1.2 比色用氯化钴

取氯化钴约32.5g,加适量的盐酸溶液(1→40)使溶解成500ml,精密量取2ml,置锥形瓶中,加水200ml,摇匀,加氨试液至溶液由浅红色转变至绿色后,加醋酸醋酸钠缓冲液(pH6.0)10ml,加热至60℃,再加二甲酚橙指示液5滴,用乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.05 mol/L)滴定至溶液显黄色。每1ml乙二胺四醋酸二钠滴定液(0.05mol/L)相当于11.90mg的CoCl2·6H2O。根据上述测定结果,在剩余的原溶液中加适量的盐酸溶液(1→40),使每1ml溶液中含59.5mg的CoCl2·6H2O,即得。

2.1.3 各种色调标准贮备液的制备

按表I精密量取比色用氯化钴液、比色用重铬酸钾液、比色用硫酸铜液与水,摇匀,即得。

表1 各种色调标准贮备液的配制

色调

比色用氯化钴液/ml

比色用重铬酸钾液/ml

比色用硫酸铜液/ml

水/ml

黄绿色

1.2

22.8

7.2

68.8

黄色

4.0

23.3

0

72.7

橙黄色

10.6

19.0

4.0

66.4

橙红色

12.0

20.0

0

68.0

棕红色

22.5

12.5

20.0

45.0

各种色调色号标准比色液的制备 按表2精密量取各色调标准贮备液与水,摇匀,即得。

表2各种色调色号标准比色液的配制

色号

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

贮备液/ml

0.5

1.0

1.5

2.0

2.5

3.0

4.5

6.0

7.5

10.0

加水量/ml

9.5

9.0

8.5

8.0

7.5

7.0

5.5

4.0

2.5

0

2.2 第二法

除另有规定外,取各品种项下规定量的供试品,加水溶解使成10ml,必要时滤过,滤液照分光光度法于规定波长处测定,吸光度不得超过规定值。

2.3 第三法(色差计法)

本法是通过色差计直接测定溶液的透射三刺激值,对其颜色进行定量表述和分析方法。当目视比色法较难判定供试品与标准比色液之间的差异时,应考虑采用本法进行测定与判断。供试品与标准比色液之间的颜色差异,可以通过分别比较它们与水之间的色差值来得到,也可以通过直接比较它们之间的色差值来得到。

现代颜色视觉理论认为,在人眼视网膜上有三种感色的锥体细胞,分别对红、绿、蓝三种颜色敏感。颜色视觉过程可分为两个阶段:第一阶段,视网膜上三种独立的锥体感色物质,有选择地吸收光谱不同波长的辐射,同时每一物质又可单独产生白和黑的反应,即在强光作用下产生白的反应,无外界刺激时产生黑的反应;第二阶段,在神经兴奋由锥体感受器向视觉中枢传导过程中,这三种反应又重新组合,最后形成三对对立性的神经反应,即红或绿、黄或蓝、白或黑的反应。最终在大脑皮层的视觉中枢产生各种颜色感觉

自然界中的每种颜色都可以用选定的、能刺激人眼中三种受体细胞的红、绿、蓝三原色,按适当比例混合而成。由此引入一个新的概念——三刺激值,即在给定的三色系统中与待测色达到色匹配所需要的三个原刺激量,分别以X、Y、Z表示。通过对众多具有正常色觉的人体(称为标准观察者,即标准眼)进行广泛的颜色比较试验,测定了每一种可见波长(400~760nm)的光引起每种锥体刺激的相对数量的色匹配函数,这些色匹配函数分别用(λ)、(λ)、(λ)来表示。把这些色匹配函数组合起来,描绘成曲线,就叫做CIE色度标准观察者的光谱三刺激值曲线(图1)。

图1 CIE 1931色度标准观察者的光谱三刺激值曲线(10°视场)

色匹配函数和三刺激值间的关系以下列方程表示;

式中 K为归化系数;

S(λ)为光源的相对光谱功率分布

P(λ)为物质色的光谱反射比或透射比;

(λ)、(λ)、(λ)为标准观察者的色匹配函数;

d(λ)为波长间隔,一般采用10nm或5nm。

当某种颜色的三刺激值确定之后,则可用其计算出该颜色在一个理想的三维颜色空间中的坐标,由此推导出许多组的颜色方程(称为表色系统)来定义这一空间。如:CIE1931-XYZ表色系统,CIE1964补充标准色度系统,CIE1976 L*a*b*色空间(CIELab均匀色空间),Hunter表色系统等。

为便于理解比对,人们通常采用CIELab均匀色空间来表示颜色及色差。该色空间由直角坐标 L*a*b*构成。在三维色坐标系的任一点都代表一种颜色,其与参比点之间的几何距离代表两种颜色之间的色差(图2和图3)。相等的距离代表相同的色差值。用仪器法对供试品溶液与其规定的标准比色液的颜色进行比较时,需比较的参数就是空白对照液的颜色和供试溶液或其规定的标准比色液颜色在均匀色空间中的差值。

图2 L*a*b*色品图

图3 L*a*b*色空间和色差△E*

在CIELab均匀色空间中,三维色坐标L*a*b*与三刺激值X、y、Z和色差之间的关系如下:明度指数L*=116×(Y/Yn1/3-16色品指数a*=500×[(X/Xn)1/3-(Y/Yn)1/3]

色品指数b*=200×[(Y/Yn1/3-(Z/Zn1/3]

以上公式仅适用于X/Xn、Y/Yn、Z/Zn>0.008856时。式中 X、y、Z为待测溶液的三刺激值;

Xn、Yn、Zn为完全漫反射体的三刺激值;

△E*为供试品溶液与标准比色液的色差;

△L*为供试品溶液与标准比色液的明度指数之差,其中△L*为正,表示供试品溶液比标准比色液颜色亮(鲜艳);

△a*、△b*为供试品溶液色与标准比色液色的色品指数之差,其中△a*、△b*为正,表示供试品比标准比色液颜色更深(饱和)。

色差计的工作原理简单地说即是模拟人眼的视觉系统,利用仪器内部的模拟积分光学系统,把光谱光度数据的三刺激值进行积分而得到颜色的数学表达式,从而计算出L*、a*、b*值及对比色的色差。图4为色差计光学系统示意图。在仪器使用的标准光源与日常观察供试品所使用光源光谱功率分布一致(比如昼光),其光电响应接收条件与标准观察者的色觉特性一致(比如10°视场)的条件下,用仪器方法测定颜色,不但能够精确、定量地测定颜色和色差,而且比目测法更为科学客观,且不随时间、地点、人员变化而发生变化。

图4色差计光学系统

2.4 1.对仪器的一般要求

使用的测色仪器一般为光电积分型色差计,照明观察条件为o/d条件或d/o条件,D65光源照明,10°视场,可直接测出三刺激值X、Y、Z,并能直接计算给出L*、a*、b*和△E*及供试品溶液的色调色号。

因溶液的颜色随着被测定溶液的液层厚度而变,所以除另有规定外,测量透射色时,应使用1cm厚度液槽。

为保证测量的可靠性,应定期对仪器进行全面的检定。在每次测量时,要用无彩色物质如水或空气对仪器进行校准,并规定它在所有波长下的透射率均为1.000。

室温时,在D65为光源、10°视场条件下,水或空气的三刺激值分别为:

X=94.81;Y=100.00;Z=107.32

2.5 2.测定法

除另有规定外,用水对仪器进行校准,取按各品种项下规定的方法分别制得的供试品溶液和标准比色液,置仪器上进行测定,供试品溶液与水的色差值△E*应不超过相应色调的标准比色液与水的色差值△E*。

如品种项下规定的色调有两种,且供试品溶液的实际色调介于两种规定色调之间,且难以判断更倾向何种色调时,将测得的供试品溶液与水的色差值(△E*)与两种色调标准比色液与水的色差值的平均值[△E*≤(△Es1*十△Es2*)/2]比较,不得更深。

3 附录Ⅺ B粒度测定法

本法用于测定制剂的粒子大小或限度。

3.1 第一法(显微镜法)

本法中的粒度,系以显微镜下观察到的长度表示。

目镜测微尺的标定 照显微鉴别法(2010年版药典一部附录Ⅱ C)标定。

3.1.1 测定法

除另有规定外,取供试品,用力摇匀[黏度较大者可按品种项下的规定加适量甘油溶液(1→2)稀释],照该剂型或品种项下的规定取供试品,置载玻片上,覆以盖玻片(注意防止气泡混入),轻压使颗粒分布均匀;半固体可直接涂于载玻片上。立即在50~100倍显微镜下检视盖玻片全部视野,应无凝聚现象,并不得检出该剂型或品种项下规定的50μm及50μm以上的粒子。再在200~500倍显微镜下检视该剂型或品种项下规定的视野内的总粒数及规定大小的粒数,计算所占百分比。

3.2 第二法(筛分法

3.2.1 1.单筛分法

除另有规定外,取供试品10g,称定重量,置规定的药筛中,筛上加盖,并在筛下配有密合的接收容器,按水平方向旋转振摇至少3分钟,并不时在垂直方向轻叩筛。取筛下的颗粒及粉末,称定重量,计算所占百分比。

3.2.2 2.双筛分法

除另有规定外,取供试品30g,称定重量,置规定的药筛中,保持水平状态过筛,左右往返,边筛动边轻叩3分钟。取不能通过小号筛和能通过大号筛的颗粒及粉末,称定重量,计算所占百分比。

4 附录Ⅺ C可见异物检查法

可见异物是指存在于注射剂、服用液体制剂中,在规定条件下目视可以观测到的不溶性物质,其粒径或长度通常大于50μm。注射剂、眼用液体制剂应在符合药品生产质量管理规范GMP)的条件下生产,产品在出厂前应采用适宜的方法逐一检查并同时剔除不合格产品。临用前,也在自然光下目视检查(避免阳光直射),如有可见异物,不得使用。

可见异物检查法有灯检法和光散射法。一般常用灯检法,也可采用光散射法。灯检法不适用的品种,如用深色透明容器包装或液体色泽较深(一般深于各标准比色液7号)的品种可选用光散射法。

实验室检测时应避免引入可见异物。当制备注射用无菌粉末无菌原料药供试品溶液时,或供试品溶液的容器不适于检测(如不透明、不规则形状容器等),需转移至适宜容器中时,均应在100级的洁净环境(如层流净化台)中进行。

用于本试验的供试品,必须按规定随机抽样

4.1 第一法(灯检法)

灯检法应在暗室中进行。

4.1.1 检查装置

如下图所示。

图 灯检法示意

A.带有遮光板的日光灯光源(光照度可在1000~4000lx范围内调节);

B.不反光的黑色背景;

C.不反光的白色背景和底部(供检查有色异物);D.反光的白色背景(指遮光板内侧)。

4.1.2 检查人员条件

远距离和近距离视力测验,均应为4.9或4.9以上(矫正后视力应为5.0或5.0以上);应无色盲。检查法

4.1.3 溶液型、乳状液及混悬型制剂

除另有规定外,取供试品20支(瓶),除去容器标签,擦净容器外壁,必要时将药液转移至洁净透明的适宜容器内;置供试品于遮光板边缘处,在明视距离(指供试品至人眼的清晰观测距离,通常为25cm),分别在黑色和白色背景下,手持供试品颈部轻轻旋转和翻转容器使药液中可能存在的可见异物悬浮(但应避免产生气泡),轻轻翻摇后即用目检视,重复3次,总时限为20秒。供试品装量每支(瓶)在10ml及10ml以下的,每次检查可手持2支(瓶)。

4.1.4 注射用无菌粉末

除另有规定外,取供试品5支(瓶),用适宜的溶剂及适当的方法使药粉全部溶解后,按上述方法检查。配带有专用溶剂的注射用无菌粉末,应先将专用溶剂按溶液型制剂检查合格后,再用以溶解注射用无菌粉末。

4.1.5 无菌原料药

除另有规定外,按抽样要求称取各品种制剂项下的最大规格量5份,分别置洁净透明的适宜容器内,用适宜的溶剂及适当的方法使药物全部溶解后,按上述方法检查。

注射用无菌粉末及无菌原料药所选用的适宜溶剂应无可见异物。如为水溶性药物,一般使用不溶性微粒检查用水(参见2010年版药典一部附录Ⅸ R不溶性微粒检查法)进行溶解制备;如为其他溶剂,则应在各品种项下中作出规定。溶剂量应确保药物溶解完全并便于观察。

注射用无菌粉末及无菌原料药溶解所用的适当方法应与其制剂使用说明中注明的临床使用前处理的方式相同。如除振摇外还需其他辅助条件,则应在各品种项下中作出规定。用无色透明容器包装的无色供试品溶液,检查时被观察样品所在处的光照度应为1000~1500lx;用透明塑料容器包装或用棕色透明容器包装的供试品溶液或有色供试品溶液,检查时被观察样品所在处的光照度应为2000~3000lx;混悬型供试品或乳状液,检查时被观察样品所在处的光照度应增加至约4000lx。

4.1.6 结果判定

各类注射剂、眼用液体制剂 在静置一定时间后轻轻旋转时均不得检出烟雾状微粒柱,且不得检出金属屑、玻璃屑、长度或最大粒径超过2mm的纤维和块状物等明显可见异物。微细可见异物(如点状物、2mm以下的短纤维和块状物等)如有检出,除另有规定外,应分别符合下列规定:

4.1.6.1 溶液型静脉注射液注射用浓溶液

20支(瓶)检查的供试品中,均不得检出明显可见异物。如检出微细可见异物的供试品仅有1支(瓶),应另取20支(瓶)同法复试,均不得检出。

4.1.6.2 溶液型非静脉用注射液

被检查的20支(瓶)供试品中,均不得检出明显可见异物。如检出微细可见异物,应另取20支(瓶)同法复试,初、复试的供试品中,检出微细可见异物的供试品不得超过2支(瓶)。

4.1.6.3 溶液型滴眼剂

被检查的20支(瓶)供试品中,均不得检出明显可见异物。如检出微细可见异物,应另取20支(瓶)同法复试,初、复试的供试品中,检出微细可见异物的供试品不得超过3支(瓶)。

4.1.6.4 混悬型、乳状液型注射液及滴眼剂

被检查的20支(瓶)供试品中,均不得检出金属屑、玻璃屑、色块、纤维等明显可见异物。

临用前配制的溶液型和混悬型滴眼剂,除另有规定外,应符合相应的可见异物规定。

4.1.6.5 注射用无菌粉末

被检查的5支(瓶)供试品中,均不得检出明显可见异物。如检出微细可见异物,每支(瓶)供试品中检出微细可见异物的数量应符合下表的规定;如有1支(瓶)不符合规定,另取10支(瓶)同法复试,均应符合规定。

类别

可见异物限度

化学药

≤4个

生化药、抗生素药和中药

≥2g

≤10个

<2g

≤8个

配带有专用溶剂的注射用无菌粉末,专用溶剂应符合相应的溶液型注射液的规定。

4.1.6.6 无菌原料药

5份检查的供试品中,均不得检出明显可见异物。如检出微细可见异物,每份供试品中检出微细可见异物的数量应符合下表的规定;如有1份不符合规定,另取10份同法复试,均应符合规定。

类别

可见异物限度

化学药

≤2个

生化药、抗生素药和中药

≤5个

既可静脉用也可非静脉用的注射剂应执行静脉用注射剂的标准。

4.2 第二法(光散射法)

当一束单色激光照射溶液时,溶液中存在的不溶性物质使入射光发生散射,散射的能量与不溶性物质的大小有关。本方法通过对溶液中不溶性物质引起的光散射能量的测量,并与规定的阈值比较,以检查可见异物。

不溶性物质的光散射能量可通过被采集的图像进行分析。设不溶性物质的光散射能量为E,经过光电信号转换,即可用摄像机采集到一个锥体高度为H,直径为D的相应立体图像。散射能量E为D和H的一个单调函数,即E=f(D,H)。同时,假设不溶性物质的光散射强度为q,摄像曝光时间为T,则又有E=g(q,T)。由此可以得出图像中的D与q、T之间的关系为D=w(q,T),也为一个单调函数关系。在测定图像中的D值后,即可根据函数曲线计算出不溶性物质的光散射能量。

4.2.1 仪器装置和检测原理

仪器由旋瓶装置、激光光源、图像采集器、数据处理系统和终端显示系统组成,并配有自动上瓶和下瓶装置。

供试品通过上瓶装置被送至旋瓶装置,旋瓶装置应能使供试品沿垂直中轴线高速旋转一定时间后迅速停止,同时激光光源发出的均匀激光束照射在供试品上;当药液涡流基本消失,瓶内药液因惯性继续旋转,图像采集器在特定角度对旋转

药液中悬浮的不溶性物质引起的散射光能量进行连续摄像,采集图像不少于75幅;数据处理系统对采集的序列图像进行处理,然后根据预先设定的阈值自动判定超过一定大小的不溶性物质的有无,或在终端显示器上显示图像供人工判定,同时记录检测结果,指令下瓶装置自动分检合格与不合格供试品。仪器校准仪器应具备自动校准功能,在检测供试品前须采用标准粒子进行校准。

除另有规定外,分别用粒径为40μm和60μm的标准粒子对仪器进行标定。根据标定结果得到曲线方程并计算出与粒径50μm相对应的检测像素值。

当把检测像素参数设定为与粒径50μm相对应的数值时,对60μm的标准粒子溶液测定3次,应均能检出。

4.2.2 检查法

溶液型注射液 除另有规定外,取供试品20支(瓶),除去不透明标签,擦净容器外壁,置仪器上瓶装置上,根据仪器的使用说明书选择适宜的测定参数,启动仪器,将供试品检测3次并记录检测结果。凡仪器判定有1次不合格者,须用灯检法作进一步确认。用深色透明容器包装或液体色泽较深等灯检法检查困难的品种不用灯检法确认。

4.2.2.1 注射用无菌粉末

除另有规定外,取供试品5支(瓶),用适宜的溶剂及适当的方法使药物全部溶解后,按上述方法检查。

4.2.2.2 无菌原料药

除另有规定外,称取各品种制剂项下的最大规格量5份,分别置洁净透明的专用玻璃容器内,用适宜的溶剂及适当的方法使药物全部溶解后,按上述方法检查。

设置检测参数时,一般情况下取样视窗的左右边线和底线应与瓶体重合,上边线与液面的弯月面成切线;旋转时间的设置应能使液面漩涡到底,以能带动固体物质悬浮并消除气泡;静置时间的设置应尽可能短,但不能短于液面漩涡消失的时间,以避免气泡干扰并保证摄像启动时固体物质仍在转动;嵌瓶松紧度参数与瓶底直径(mm)基本相同,可根据安瓿质量调整,如瓶体不平正,转动时瓶体摇动幅度较大,气泡易产生,则应将嵌瓶松紧度调大以减小摇动,但同时应延长旋转时间,使漩涡仍能到底。

4.2.3 结果判定

同灯检法。

5 附录Ⅺ D电感耦合等离子体质谱法

本法是以等离子体为离子源的一种质谱型元素分析方法。主要用于进行多种元素的同时测定,并可与其他色谱分离技术联用,进行元素价态分析。

样品由载气(氩气)引入雾化系统进行雾化后,以气溶胶形式进入等离子体中心区,在高温和惰性气氛中被去溶剂化、汽化解离和电离,转化成带正电荷的正离子,经离子采集系统进入质谱仪,质谱仪根据质荷比进行分离,根据元素质谱峰强度测定样品中相应元素的含量。

本法灵敏度高,适用于各类药品从痕量到微量的元素分析,尤其是痕量重金属元素的测定。

5.1 1.仪器的一般要求

电感耦合等离子体质谱仪由样品引入系统、电感耦合等离子体(ICP)离子源、接口、离子透镜系统、四极质量分析器、检测器等构成,其他支持系统有真空系统、冷却系统、气体控制系统、计算机控制及数据处理系统等。

5.1.1 样品引入系统

按样品的状态不同分为液体、气体或固体进样,通常采用液体进样方式。样品引入系统主要由样品提升和雾化两个部分组成。样品提升部分一般为蠕动泵,也可使用自提升雾化器。要求蠕动泵转速稳定,泵管弹性良好,使样品溶液匀速泵入,废液顺畅排出。雾化部分包括雾化器和雾化室。样品以泵入方式或自提升方式进入雾化器后,在载气作用下形成小雾滴并进入雾化室,大雾滴碰到雾化室壁后被排除,只有小雾滴可进入等离子体离子源。要求雾化器雾化效率高,雾化稳定性高,记忆效应小,耐腐蚀;雾化室应保持稳定的低温环境,并应经常清洗。常用的溶液型雾化器有同心雾化器、交叉型雾化器等;常见的雾化室有双通路型和旋流型。实际应用中宜根据样品基质、待测元素、灵敏度等因素选择合适的雾化器和雾化室。

5.1.2 电感耦合等离子体离子源

电感耦合等离子体的“点燃”,需具备持续稳定的高纯氩气流(纯度应不小于99.99%)、炬管、感应圈、高频发生器、冷却系统等条件。样品气溶胶被引入等离子体离子源,在6000~10000K的高温下,发生去溶剂、蒸发、解离、原子化、电离等过程,转化成带正电荷的正离子。测定条件如射频功率,气体流量,炬管位置,蠕动泵流速等工作参数可以根据供试品的具体情况进行优化,使灵敏度最佳,干扰最小。

5.1.3 接口系统

接口系统的功能是将等离子体中的样品离子有效地传输到质谱仪。其关键部件是采样锥和截取锥,平时应经常清洗,并注意确保锥孔不损坏,否则将影响仪器的检测性能

5.1.4 离子透镜系统

位于截取锥后面高真空区的离子透镜系统的作用是将来自截取锥的离子聚焦到质量过滤器,并阻止中性原子进入和减少来自ICP的光子通过量。离子透镜参数的设置应适当,要注意兼顾低、中、高质量的离子都具有高灵敏度。

5.1.5 四极杆质量分析器

质量分析器通常为四极杆质量分析器,可以实现质谱扫描功能。四极杆的作用是基于在四根电极之间的空间产生一随时间变化的特殊电场,只有给定m/z的离子才能获得稳定的路径而通过极棒,从另一端射出。其他离子则将被过分偏转,与极棒碰撞,并在极棒上被中和而丢失,从而实现质量选择。测定中应设置适当的四极杆质量分析器参数,优化质谱分辨率和响应并校准质量轴。

5.1.6 检测器

通常使用的检测器是双通道模式的电子倍增器,四极杆系统将离子按质荷比分离后引入检测器,检测器将离子转换成电子脉冲,由积分线路计数。双模式检测器采用脉冲计数和模拟两种模式,可同时测定同一样品中的低浓度和高浓度元素。检测低含量信号时,检测器使用脉冲模式,直接记录撞击到检测器的总离子数量;当离子浓度较大时,检测器则自动切换到模拟模式进行检测,以保护检测器,延长使用寿命。测定中应注意设置适当的检测器参数,以优化灵敏度,对双模式检测信号(脉冲和模拟)进行归一化校准。

5.1.7 其他支持系统

真空系统由机械泵和分子涡轮泵组成,用于维持质谱分析器工作所须的真空度,真空度应达到仪器使用要求值。冷却系统包括排风系统和循环水系统,其功能是排出仪器内部的热量,循环水温度和排风口温度应控制在仪器要求范围内。气体控制系统运行应稳定,氩气的纯度应不小于99.99%。

5.2 2.干扰和校正

电感耦合等离子体质谱法测定中的干扰大致可分为两类:一类是质谱型干扰,主要包括同质异位素、多原子离子、双电荷离子等;另一类是非质谱型干扰,主要包括物理干扰、基体效应、记忆效应等。

干扰的消除和校正方法有优化仪器参数、内标校正、干扰方程校正、碰撞反应池技术、稀释校正、标准加入法等。

5.3 3.供试品溶液的制备

所用试剂一般是酸类,包括硝酸、盐酸、过氧化氢高氯酸硫酸氢氟酸,以及混合酸如王水等,纯度应为优级纯。其中硝酸引起的干扰最小,是样品制备的首选酸。所用水应为去离子水(电阻率应不小于18MΩ)。

5.3.1 供试品溶液

制备时应同时制备试剂空白标准溶液的介质和酸度应与供试品溶液保持一致。

5.3.2 固体样品

除另有规定外,称取样品适量(0.1~3g),结合实验室条件以及样品基质类型选用合适的消解方法。消解方法有敞口容器消解法、密闭容器消解法和微波消解法。微波消解法所需试剂少,消解效率高,对于降低试剂空白值、减少样品制备过程中的污染或待测元素的挥发损失以及保护环境都是有益的,可作为首选方法。样品消解后根据待测元素含量定容至适当体积后即可进行质谱测定。

5.3.3 液体样品

根据样品的基质、有机物含量和待测元素含量等情况,可选用直接分析、稀释或浓缩后分析、消化处理后分析等不同的测定方式。

5.4 4.测定法

对待测元素,目标同位素的选择一般需根据待测样品基体中可能出现的干扰情况,选取干扰少,丰度较高的同位素进行测定;有些同位素需采用干扰方程校正;对于干扰不确定的情况亦可选择多个同位素测定,以便比较。常用测定方法包括:

5.4.1 (1)标准曲线法

在选定的分析条件下,测定待测元素不少于三个不同浓度的标准系列溶液(标准溶液的介质和酸度应与供试品溶液一致),以选定的分析峰的响应值为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线,计算回归方程,相关系数应不低于0.99。测定供试品溶液,从标准曲线或回归方程中查得相应的浓度,计算样品中各待测元素的含量。

在同样的分析条件下进行空白试验,根据仪器说明书的要求扣除空白干扰。

附 内标校正的标准曲线法

在每个样品(包括标准溶液、供试品溶液和试剂空白)中添加相同浓度的内标(ISTD)元素,以标准溶液待测元素分析峰响应值与内标元素参比峰响应值的比值为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线,计算回归方程。利用供试品中待测元素分析峰响应值和内标元素参比峰响应值的比值,扣除试剂空白后,从标准曲线或回归方程中查得相应的浓度,计算样品中各待测元素的含量。使用内标可有效地校正响应信号的波动,内标校正的标准曲线法为最常用的测定法。

选择内标时应考虑如下因素:待测样品中不含有该元素;与待测元素质量数接近;电离能与待测元素电离能相近;元素的化学特性。内标的加入可以在每个样品和标准溶液中分别加入,也可通过蠕动泵在线加入。

5.4.2 (2)标准加入法

取同体积的供试品溶液4份,分别置4个同体积的量瓶中,除第1个量瓶外,在其他3个量瓶中分别精密加入不同浓度的待测元素标准溶液,分别稀释至刻度,摇匀,制成系列待测溶液。在选定的分析条件下分别测定,以分析峰的响应值为纵坐标,待测元素加入量为横坐标,绘制标准曲线,将标准曲线延长交于横坐标,交点与原点的距离所相应的含量,即为供试品取用量中待测元素的含量,再以此计算供试品中待测元素的含量。此法仅适用于第(1)法中标准曲线呈线性并通过原点的情况。

6 附录Ⅺ E电感耦合等离子体原子发射光谱法

本法是以等离子体为激发光源的原子发射光谱分析方法,可进行多元素的同时测定。

样品由载气(氩气)引入雾化系统进行雾化后,以气溶胶形式进入等离子体的中心通道,在高温和惰性气氛中被充分蒸发、原子化、电离和激发,使所含元素发射各自的特征谱线。根据各元素特征谱线的存在与否,鉴别样品中是否含有某种元素(定性分析);由特征谱线的强度测定样品中相应元素的含量(定量分析)。

本法适用于各类药品从痕量到常量的元素分析,尤其适用于矿物类中药、营养补充剂等的元素定性定量测定。

6.1 1.仪器的一般要求

电感耦合等离子体原子发射光谱仪由样品引入系统、电感耦合等离子体(ICP)光源、色散系统、检测系统等构成,并配有计算机控制及数据处理系统、冷却系统、气体控制系统等。

6.1.1 样品引入系统

按样品状态不同分为液体或固体进样,通常采用液体进样方式。样品引入系统主要由样品提升和雾化两个部分组成。样品提升部分一般为蠕动泵,也可使用自提升雾化器。要求蠕动泵转速稳定,泵管弹性良好,使样品溶液匀速泵人,废液顺畅排出。雾化部分包括雾化器和雾化室。样品以泵入方式或自提升方式进入雾化器后,在载气作用下形成小雾滴并进入雾化室,大雾滴碰到雾化室壁后被排除,只有小雾滴可进入等离子体源。要求雾化器雾化效率高,雾化稳定性高,记忆效应小,耐腐蚀;雾化室应保持稳定的低温环境,并应经常清洗。常用的溶液型雾化器有同心雾化器、交叉型雾化器等;常见的雾化室有双通路型和旋流型。实际应用中宜根据样品基质、待测元素、灵敏度等因素选择合适的雾化器和雾化室。

6.1.2 电感耦合等离子体(ICP)光源

电感耦合等离子体光源的“点燃”,需具备持续稳定的纯氩气流、炬管、感应圈、高频发生器、冷却系统等条件。样品气溶胶被引入等离子体光源,在6000~10000K的高温下,发生去溶剂、蒸发、解离、激发、电离、发射谱线。根据光路采光方向,可分为水平观察ICP光源和垂直观察ICP光源;双向观察ICP光源可实现垂直/水平双向观察。实际应用中宜根据样品基质、待测元素、波长、灵敏度等因素选择合适的观察方式。

6.1.3 色散系统

电感耦合等离子体原子发射光谱的单色器通常采用光栅或棱镜与光栅的组合,光源发出的复合光经色散系统分解成按波长顺序排列的谱线,形成光谱。

6.1.4 检测系统

电感耦合等离子体原子发射光谱的检测系统为光电转换器,它是利用光电效应将不同波长光的辐射能转化成电信号。常见的光电转换器有光电倍增管和固态成像系统两类。固态成像系统是一类以半导体硅片为基材的光敏元件制成的多元阵列集成电路式的焦平面检测器,如电荷耦合器件(CCD)、电荷注入器件(CID)等,具有多谱线同时检测能力,检测速度快,动态线性范围宽,灵敏度高等特点。检测系统应保持性能稳定,具有良好的灵敏度、分辨率和光谱响应范围。

6.1.5 冷却和气体控制系统

冷却系统包括排风系统和循环水系统,其功能是排出仪器内部的热量。循环水温度和排风口温度应控制在仪器要求范围内。气体控制系统运行应稳定,氩气的纯度应不小于99.99%。

6.2 2.干扰和校正

电感耦合等离子体原子发射光谱法测定中通常存在的干扰大致可分为两类:一类是光谱干扰,主要包括连续背景和谱线重叠干扰等;另一类是非光谱干扰,主要包括化学干扰、电离干扰、物理干扰等。

干扰的消除和校正通常可采用空白校正、稀释校正、内标校正、背景扣除校正、干扰系数校正、标准加入等方法。

6.3 3.供试品溶液的制备

所用试剂一般是酸类,包括硝酸、盐酸、过氧化氢、高氯酸、硫酸、氢氟酸,以及混合酸如王水等,纯度应不低于优级纯。其中硝酸引起的干扰最小,是供试品溶液制备的首选酸。所用水应为去离子水(电导率应小于0.056μS/cm)。

供试品溶液制备时应同时制备试剂空白,标准溶液的介质和酸度应与供试品溶液保持一致。

6.3.1 固体样品

除另有规定外,称取样品适量(0.1~3g),结合实验室条件以及样品基质类型选用合适的消解方法。消解方法一般有敞口容器消解法、密闭容器消解法和微波消解法。微波消解法所需试剂少,消解效率高,对于降低试剂空白值、减少样品制备过程中的污染或待测元素的挥发损失以及保护环境都是有益的,可作为首选方法。样品消解后根据待测元素含量定容至适当体积后即可进行测定。

6.3.2 液体样品

根据样品的基质、有机物含量和待测元素含量等情况,可选用直接分析、稀释或浓缩后分析、消化处理后分析等不同的测定方式。

6.4 4.测定法

分析谱线的选择原则一般是选择干扰少,灵敏度高的谱线;同时应考虑分析对象:对于微量元素的分析,采用灵敏线,而对于高含量元素的分析,可采用较弱的谱线。

6.4.1 定性鉴别

根据原子发射光谱中各元素固有的一列特征谱线的存在与否可以确定供试品中是否含有相应的元素。元素特征光谱中强度最大的谱线称为元素的灵敏线。在供试品光谱中,某元素灵敏线的检出限即为相应元素的检出限。

6.4.2 定量测定

6.4.2.1 (1)标准曲线法

在选定的分析条件下,测定不少于三个不同浓度的待测元素的标准系列溶液(标准溶液的介质和酸度应与供试品溶液一致),以分析线的响应值为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线,计算回归方程。除另有规定外,相关系数应不低于0.99。测定供试品溶液,从标准曲线或回归方程中查得相应的浓度,计算样品中各待测元素的含量。在同样的分析条件下进行空白试验,根据仪器说明书的要求扣除空白干扰。

附 内标校正的标准曲线法

在每个样品(包括标准溶液、供试品溶液和试剂空白)中添加相同浓度的内标(ISTD)元素,以标准溶液待测元素分析线的响应值与内标元素参比线响应值的比值为纵坐标,浓度为横坐标,绘制标准曲线,计算回归方程。利用供试品中待测元素分析线的响应值和内标元素参比线响应值的比值,从标准曲线或回归方程中查得相应的浓度,计算样品中含待测元素的含量。

内标元素及参比线的选择原则如下:

内标元素的选择 外加内标元素在分析试样中应不存在或含量极微可忽略,如样品基体元素的含量较稳时,亦可用该基体元素作内标;内标元素与待测元素应有相近的特性;同族元素,具相近的电离能。

参比线的选择 激发能应尽量相近;分析线与参比线的波长及强度接近;无自吸现象且不受其他元素干扰;背景应尽量小。

6.4.2.2 (2)标准加入法

取同体积的供试品溶液4份,分别置4个同体积的量瓶中,除第1个量瓶外,在其他3个量瓶中分别

精密加入不同浓度的待测元素标准溶液,分别稀释至刻度,摇匀,制成系列待测溶液。在选定的分析条件下分别测定,以分析线的响应值为纵坐标,待测元素加入量为横坐标,绘制标准曲线,将标准曲线延长交于横坐标,交点与原点的距离所相应的含量,即为供试品取用量中待测元素的含量,再以此计算供试品中待测元素的含量。

7 附录Ⅺ F渗透压摩尔浓度测定法

生物膜,例如人体的细胞膜毛细血管壁,一般具有半透膜的性质,溶剂通过半透膜由低浓度溶液向高浓度溶液扩散的现象称为渗透,阻止渗透所需施加的压力,即为渗透压。在涉及溶质的扩散或通过生物膜的液体转运各种生物过程中,渗透压都起着极其重要的作用。因此,在制备注射剂、眼用液体制剂等药物制剂时,必须关注其渗透压。处方中添加了渗透压调节剂的制剂,均应控制其渗透压摩尔浓度。

静脉输液营养液、电解质或渗透利尿药(如甘露醇注射液)等制剂,应在药品说明书上标明其渗透压摩尔浓度,以便临床医生根据实际需要对所用制剂进行适当的处置(如稀释)。正常人体血液的渗透压摩尔浓度范围为285~310mOsmol/kg,0.9%氯化钠溶液或5%葡萄糖溶液的渗透压摩尔浓度与人体血液相当。

溶液的渗透压,依赖于溶液中溶质粒子的数量,是溶液的依数性之一,通常以渗透压摩尔浓度(Osmolality)来表示,它反映的是溶液中各种溶质对溶液渗透压贡献的总和

渗透压摩尔浓度的单位,通常以每千克溶剂中溶质的毫渗透压摩尔来表示,可按下列公式计算毫渗透压摩尔浓度(mOsmol/kg):

式中,n为一个溶质分子溶解或解离时形成的粒子数。在理想溶液中,例如葡萄糖n=1,氯化钠或硫酸镁n=2,氯化钙n=3,枸橼酸钠n=4。

在生理范围及稀溶液中,其渗透压摩尔浓度与理想状态下的计算值偏差较小;随着溶液浓度的增加,与计算值比较,实际渗透压摩尔浓度下降。例如0.9%氯化钠注射液,按上式计算,毫渗透压摩尔浓度是2×1000×9/58.4=308mOsmol/kg,而实际上在此浓度时氯化钠溶液的”稍小于2,其实际测得值是286mOsmol/kg;复杂混合物,如水解蛋白注射液的理论渗透压摩尔浓度不容易计算,因此通常采用实际测定值表示。

7.1 1.渗透压摩尔浓度的测定

通常采用测量溶液的冰点下降来间接测定其渗透压摩尔浓度。在理想的稀溶液中,冰点下降符合△Tf=Kf·m的关系,式中,△Tf为冰点下降,Kf为冰点下降常数(当水为溶剂时为1.86),m为重量摩尔浓度。而渗透压符合Po=Ko·m的关系,式中,Po为渗透压,Ko为渗透压常数,m为溶液的重量摩尔浓度。由于两式中的浓度等同,故可以用冰点下降法测定溶液的渗透压摩尔浓度。

7.1.1 仪器

采用冰点下降的原理设计的渗透压摩尔浓度测定仪通常由制冷系统、用来测定电流或电位差的热敏探头和振荡器(或金属探针)组成。测定时将测定探头浸入供试溶液的中心,并降至仪器的冷却槽中。启动制冷系统,当供试溶液的温度降至凝固点以下时,仪器采用振荡器(或金属探针)诱导溶液结冰,自动记录冰点下降的温度。仪器显示的测定值可以是冰点下降的温度,也可以是渗透压摩尔浓度。

7.1.2 标准溶液的制备

取基准氯化钠试剂,于500~650℃干燥40~50分钟,置干燥器(硅胶)中放冷至室温。根据需要,按表中所列数据精密称取适量,溶于1kg水中,摇匀,即得。表 渗透压摩尔浓度测定仪校正用标准溶液

每1kg水中氯化

钠的重量/g

毫渗透压摩尔浓度/

mOsmol.kg-1

冰点下降温度

△T/℃

3.087

100

0.186

6.260

200

0.372

9.463

300

0.558

12.684

400

0.744

15.916

500

0.930

19.147

600

1.116

22.380

700

1.302

7.1.3 供试品溶液

供试品如为液体,通常可直接测定;如其渗透压摩尔浓度大于700mOsmol/kg或为浓溶液,可用适宜的溶剂(通常为注射用水)稀释至表中测定范围内;如为固体(如注射用无菌粉末),可采用药品标签或说明书中的规定溶剂溶解并稀释至表中测定范同内。需特别注意的是,溶液经稀释后,粒子间的相互作用与原溶液有所不同,一般不能简单地将稀释后的测定值乘以稀释倍数来计算原溶液的渗透压摩尔浓度。例如,甘露醇注射液、氨基酸注射液等高渗溶液和注射用无菌粉末可用适宜的溶剂(如注射用水)溶解、稀释后测定,并在各品种项下规定具体的溶解或稀释方法。

7.1.4 测定法

按仪器说明书操作,首先取适量新沸放冷的水调节仪器零点,然后由表中选择两种标准溶液(供试品溶液的渗透压摩尔浓度应介于两者之间)校正仪器,再测定供试品溶液的渗透压摩尔浓度或冰点下降值。

7.2 2.渗透压摩尔浓度比的测定

供试品溶液与0.9% (g/ml)氯化钠标准溶液的渗透压摩尔浓度比率称为渗透压摩尔浓度比。用渗透压摩尔浓度测定仪分别测定供试品溶液与0.9%(g/ml)氯化钠标准溶液的渗透压摩尔浓度OT与Os,方法同渗透压摩尔浓度测定法,并用下列公式计算渗透压摩尔浓度比:

渗透压摩尔浓度比=OT/OS

渗透压摩尔浓度比的测定用标准溶液的制备 精密称取经500~650℃干燥40~50分钟并置干燥器(硅胶)中放冷的基准氯化钠0.900g,加水使溶解并稀释至100ml,摇匀,即得。

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