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血清碱性磷酸酶

1 拼音

xuè qīng jiǎn xìng lín suān méi

2 英文参考

serum alkaline phosphatase

3 概述

碱性磷酸酶(ALP))属磷酸单酯水解酶,是一组特异的磷酸酯酶。该酶广泛分布人体组织体液,以骨、肝、乳腺、小肠、肾中含量较高,其大部分由骨细胞产生,小部分来自肝,经胆汁排入肠道。ALP测定方法主要是比色法和连续监测法。

4 血清碱性磷酸酶的医学检查

4.1 检查名称

血清碱性磷酸酶

4.2 分类

血液生化检查 > 酶类测定

4.3 取材

血液

4.4 血清碱性磷酸酶的测定原理

(1)比色法:ALP在碱性条件下使磷酸苯二钠水解,生成磷酸和游离酚,后者与4-氨基安替比林作用,并经铁氰化钾氧化成红色醌类化合物,其颜色的深浅与ALP活性成正比。

(2)连续监测法:ALP在碱性条件下,使磷酸对硝基苯酚(4-NPP)释放出磷酸基团,AMP参与磷酸酰基转移,促进酶反应速率,生成游离的对硝基苯酚(4-NP),并形成黄色的醌,其吸光度的增高速率与酶活力成正比。

4.5 试剂

(1)比色法:

①0.1mol/L碳酸盐缓冲液(pH10.0):称取无水碳酸钠6.36g,碳酸氢钠3.36g,4-氨基安替比林1.5g,溶于800ml蒸馏水中,移入1000ml容量瓶内,加蒸馏水至刻度,置棕色瓶内保存

②20mmol/L磷酸苯二钠溶液:称取磷酸苯二钠(AR)2.18g,迅速加入已煮沸的500ml蒸馏水中,冷却后加入氯仿2ml防腐,冰箱保存。此为基质液。

③铁氰化钾溶液:称取铁氰化钾2.5g,硼酸17g,分别溶于400ml蒸馏水中,混合后加水至1000ml,置棕色瓶内避光保存。出现蓝绿色应弃去。

④酚标准贮存液(1mg/ml):称取重蒸馏酚1.0g,溶于0.1mol/L盐酸中,并加至1000ml刻度。也可购买标准液。

⑤酚标准应用液(0.05mg/ml):取酚标准贮存液5ml,加蒸馏水至100ml。

(2)连续监测法:

①1.8mol/L AMP缓冲液(pH10.3):称取2-氨基-2甲基-1-丙醇(AMP,MW89.14)160g,加1mol/L盐酸320ml混合,加500ml新煮沸已凉的蒸馏水,调pH至10.3±0.02(30℃),并加上述蒸馏水至1000ml,置紧塞瓶中于冰箱保存。

②10.5mmol/L氯化镁溶液:称取氯化镁(MgCl2·6H2O,MW20 3.31)0.21g,溶于水中,并稀释至100ml,室温保存。

③31.5mmol/L磷酸对硝基苯酚溶液(4-NPP):称磷酸对硝基苯酚二钠盐(含6分子水,MW 371.15)120.8mg,溶于100ml蒸馏水中,置棕色瓶内于冰箱保存。

④底物缓冲液(0.84mol/L AMP,15mmol/L 4-NPP,0.5mmol/L MgCl2,pH10.3)将AMP、4-NPP和MgCl2 3种溶液按10∶10∶1混合,37℃预温待用。

4.6 操作方法

(1)比色法:按表1操作。

充分混匀,在510nm处,以蒸馏水调零,记录各管吸光度,以测定管与对照管吸光度差值,查标准曲线。

(2)连续监测法:各实验室可根据分析仪型号及操作说明书而定,主要参数:温育时间30s,连续监测时间60s,波长405nm,吸液量500μl,温度37℃,标本与试剂体积之比1∶50,系数2757。

4.7 正常值

(1)比色法:

成人:3~13金氏单位;

儿童:5~28金氏单位。

(2)连续监测法:

37℃,女性1~12岁<500U/L;>15岁40~150U/L。

男性1~12岁<500U/L;12~15岁<750U/L;>25岁40~150U/L。

4.8 化验结果临床意义

血清ALP测定主要用于肝胆系统骨骼疾病的诊断,尤其对黄疸类型的鉴别更具有参考价值。

(1)阻塞性黄疸:肝内、外阻塞性黄疸患者因胆汁排泄不畅,ALP滞留于血中而增高,其增高的程度与梗阻的程度、持续的时间呈正比。以肝外阻塞>肝内阻塞,完全阻塞>不完全阻塞,恶性肿瘤胆石症

(2)伴有黄疸的急、慢性肝炎,肝硬化,肝坏死等:ALP活性也增高。一般认为,肝细胞性黄疸患者ALP持续低水平升高,若胆红素逐渐升高,而ALP降低,提示肝细胞严重受损。反之,则说明肝细胞逐渐恢复。严重弥漫性肝损伤时,ALP活性降低。

(3)肝癌:约半数原发性肝癌和90%转移性肝癌ALP升高,在肝病中升高最为显著。无黄疸患者ALP异常升高应警惕肝癌之可能。其他肿瘤ALP亦可升高。

(4)骨骼系统疾病:骨软化症佝偻病骨折恢复期等,因ALP生成亢进,使ALP活性升高。

(5)ALP活性降低:常见于克汀病维生素C缺乏缺乏症、磷酸酶过少症。偶见于甲状腺功能减退恶性贫血营养不良

4.9 附注

(1)比色法:

①基质液中不应含游离酚,如空白管显红色,则说明磷酸苯二钠已分解,应重新配制。

②铁氰化钾应避光保存,显蓝色则失效。加入后应迅速混匀,以充分显色。

溶血及黄疸血清应做自身对照管,以清除误差

(2)连续监测法:

①应空腹采血。高脂饮食可使小肠合成ALP增高,高糖饮食也可使酶活力升高,高蛋白饮食则使酶活力降低。

②血清和肝素抗凝血浆结果一致。溶血标本酶活力下降,凡可络合酶的抗凝剂均可抑制酶活性

③温度可影响测定结果。室温及冰箱贮存血清均可使酶活性升高,置1~4天,酶活性增高3%~6%,冰冻血清则酶活性降低,复温后则恢复,故标本最好新鲜,及时测定。

④缓冲液种类及试剂纯度均可影响测定结果。缓冲液种类不同,其参考区间差别较大。用作摩尔吸光系数校正的标准物——对硝基苯酚和作底物用的磷酸对硝基苯酚必须达一定规格

4.10 相关疾病

黄疸、胆石症、肝硬化、原发性肝癌、转移性肝癌

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