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血清肌红蛋白

1 拼音

xuè qīng jī hóng dàn bái

2 英文参考

serum myoglobin

SMb

3 概述

血清肌红蛋白(Mb)存在于心肌与其他肌肉组织中,其分子量为17500D,Mb是急性心肌梗死AMI)病人升高的最早标志物之一,2~4h血中浓度就可以升高,6~10h几乎所有AMI患者Mb都升高,因此Mb阳性特别有助于早期AMI的诊断。Mb很快从血中清除,在发病24h内可恢复到正常,所以Mb阴性特别有助排除AMI病程中观察有无梗死扩展。Mb测定方法RIAELISA免疫比浊法等,但由于Mb在AMI诊断中为急诊项目,近年来出现多种适合急诊的技术,其中免疫比浊法能在10min内完成测定。

4 血清肌红蛋白的医学检查

4.1 检查名称

血清肌红蛋白

4.2 分类

血液生化检查 > 蛋白质测定

4.3 取材

血液

4.4 血清肌红蛋白的测定原理

(1)ELISA法样品中的Mb和酶标Mb与Mb抗体竞争结合,酶标Mb-Mb抗体复合物中的辣根过氧化物作用于底物(OPD-H2O2)产生有色物质,颜色深浅与样品中Mb浓度成反比,查半对数坐标曲线即得样品Mb浓度。

(2)RIA法:血清中的Mb和125Ⅰ-Mb在缓冲液中共同竞争性的与抗体结合。加入PR分离剂,125Ⅰ-Mb-抗体复合物和抗兔IgG结合而沉淀,经离心分离,测沉淀物的放射性,计算各标准浓度点的B/B0%。从标准曲线上可得出血清中Mb浓度。

4.5 试剂

(1)ELISA法:

①PB溶液:0.02mol/L PB,PH7.2。

②1%正常兔血清:用含有0.2%戊二醛的PB溶液将正常兔血清稀释成1%。

③4%正常人血清:用含有0.1g/L硫柳汞的PB溶液把正常人血清稀释成4%。

包被液:用含有0.2%戊二醛的PB溶液把Mb抗体配成30μg/mL。

洗涤液:配成含有0.05% Tween20的PB溶液。

⑥稀释液:牛血白蛋白用含有0.1g/L硫柳汞的PB溶液配成1g/L。

⑦底物溶液:取邻苯二胺40mg加入pH5.0磷酸盐-柠檬酸缓冲液(0.1mol/L柠檬酸24.3ml,加0.2mol/L Na2HPO4 25.7ml混合)至100ml,临用前加H2O20.15ml。

⑧酶标Mb溶液:用稀释液把干燥酶标Mb配成200ng/ml。

⑨标准Mb:酶标Mb和Mb抗体有商品供应。

(2)RIA法:

①50mmol/L pH7.4PBS。

抗血清:取经提取,纯化和鉴定的人Mb,按每只新西兰兔1mg于1ml蒸馏水中,加1ml福氏完全佐剂乳化,按常规方法免疫获得抗血清。滴度可达1∶30000,和血清中蛋白质及Hb无交叉反应。按可供测100管量分装,冷冻干燥,用前加10.5ml PBS溶解

125Ⅰ-Mb取高纯度的人Mb10μg/10μl,采用Bolten-Hunter联接法标记125Ⅰ。测定免疫活性,分装每瓶74KBq(2μCi),冷冻干燥。用前加11mlPBS溶解。

④标准人Mb浓度:取人Mb液,用正常羊血清或20g/L BSA稀释成25、50、100、200μg/L,分装每瓶0.5ml,冷冻干燥。用前加0.5ml蒸馏水溶解。

⑤PR试剂:用驴抗兔IgG抗血清制备。

4.6 操作方法

(1)ELISA法:取一清洁干燥聚丙乙烯微孔反应板,标明空白、标准和测定,按以下步骤进行:

①空白对照孔加入200μl%正常兔血清,其余孔各加入200μl包被液(内含Mb抗体),37℃放置30min,再置4℃过夜,弃去上层液,用洗涤液洗3次,每次放室温3min。

②空白对照孔加入100μl14%正常人血清;标准孔各加入5、10、20、40、80、160、320ng/ml的标准Mb溶液(用稀释液配成)20μl,再加入4%正常人血清,测定孔加入20μl样品血清,再加入4%正常人血清8μl。每孔各加入100μl酶标Mb溶液,置37℃1h,弃去溶液,用洗涤液洗3次。

③每孔各加入200μl底物溶液,37℃15min(避光显色)。

④每孔加入2mol/L H2SO4以终止反应,振荡1min,放置室温10min,以空白对照孔调零,在492nm处读取各孔吸光度。

(2)RIA法:

①取10×75mm塑料试管,零标准管加20g/L BSA液0.1ml,标准管(S1~4)加标准液0.1ml,测定管加待测血清0.1ml。每管各加抗血清0.1ml,混合后放37℃,水浴中20min。

②每管各加125Ⅰ-Mb液0.1ml,混合,放37℃水浴中20min,再向各管加PR试剂0.5ml,继续放37℃水浴中30min。

③离心(3500r/min)15min。弃去上清液,在自动γ免疫计数器上测放射性。

④以B/B0%为纵坐标,相对应的标准Mb浓度为横坐标,绘制标准曲线。根据样品管的B/B0%,从标准曲线上查得样品中Mb浓度。

4.7 正常值

(1)ELISA法:3.5~22.8ng/ml。

(2)RIA法:健康成人血清29±16.3μg/L。

4.8 化验结果临床意义

(1)测定血清中的Mb是早期诊断急性心肌梗死的敏感指标;从胸痛发作后12h取血,血清Mb就出现升高,此时CKAST正常。发病24h达高峰。

(2)心脏外科手术病人血清Mb升高,可以作为判断心肌损伤程度及愈合情况的一个重要客观指标。

(3)在临床肌病研究中发现假性肥大型肌营养不良病人血清Mb升高;最高可达1150μg/L。

(4)急性或慢性肾功能不全、严重的充血性心力衰竭等也升高。

4.9 附注

剧烈运动、肌内注射、肌肉创伤、心导管术等。也可使肌红蛋白升高。

4.10 相关疾病

急性心肌梗死、充血性心力衰竭

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